[发明专利]一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法

权利要求书

1.一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S101、将-22℃保存的发光菌冻干粉进行复苏，得到复苏菌液；

S102、取0.1 mL复苏菌液，使用毒性检测仪读取其发光强度，发光强度大于100万光子数即可用于检测砷污染土壤急性毒性；

S103、采取待检测砷污染土壤样本，并对其进行浸出处理，得到浸出水样；

S104、取浸出水样1 mL，加入0.1 mL 渗透压调节液，混匀，得到调节渗透压后的浸出水样；

S105、使用毒性检测仪进行检测，先读取0.1 mL 复苏菌液的初始发光强度，再取调节渗透压后的浸出水样0.9 mL 加入到0.1 mL 复苏菌液中，混匀后恒温3~8 min，检测其加样后发光强度，并计算相对发光度；

所述步骤S101中复苏的方法分为预复苏阶段和磁珠复苏阶段，包括以下步骤：

1）预复苏阶段

将发光菌冻干粉投加至4℃保存的1 mL Microtox 稀释液中复苏15 min；

2）磁珠复苏阶段

随后依次投加温度为15℃、21℃、28℃的磁珠复苏5~8 min，磁珠每次投加量为10~15粒/mL，磁珠粒径为0.5~1 mm，且在磁珠复苏期间持续施加交变磁场，交变磁场的磁场强度为0.1~0.5 mT，磁场频率为10~15Hz；

其中，磁珠每次投加条件为：当磁珠投加后，磁珠温度与Microtox 稀释液温差＜1℃时，则进行下一次磁珠的投加。

2.根据权利要求1所述的一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法，其特征在于，所述发光菌为费氏弧菌。

3.根据权利要求1所述的一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤S102中使用毒性检测仪的ATP模式读取复苏菌液的发光强度；所述步骤S105中使用毒性检测仪的B-Tox模式进行检测。

4.根据权利要求1所述的一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤S103中浸出处理包括以下步骤：

1）秤取待检测砷污染土壤样本放置于研磨钵中，并按照待检测砷污染土壤样本质量的30%添加陶瓷空心球，按照每1kg添加8~12L计算出所需浸提剂的体积，待用；

2）使用研磨棒对待检测砷污染土壤样本研磨处理，同时滴加10~20%体积百分数的浸提剂进行湿磨，同时对研磨的待检测砷污染土壤样本持续进行红外光照照射，得到浸提混合物；

3）将步骤2）浸提混合物与所剩余的浸提剂混匀后放置于振荡装置，在转速40±5 r/min，温度20±5℃下振荡8~12 h；

4）随后静置1~2 h后，通过高压过滤器上过滤，取滤液在4℃下保存，得到浸出水样。

5.根据权利要求4所述的一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法，其特征在于，所述浸提剂为0.1 mol/L盐酸浸提剂；所述陶瓷空心球内填装有石墨和碳化硅按照3~5：2质量比混合压制成的填充球体，且陶瓷空心球在使用前浸泡在10~15%质量浓度的多巴胺水溶液中10~15 min，随后使用去离子水冲洗2~3次；所述红外光照功率为500~1200W，波长范围为30~50 μm。

6.根据权利要求1所述的一种利用发光菌检测砷污染土壤急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤S105相对发光度的计算方法为：

 其中，相对发光度≥90%为低毒或无毒；40%≤相对发光度＜90%为中毒；20%≤相对发光度＜40%为高毒；相对发光度＜20%为剧毒。