[发明专利]一种磁珠-DNA探针、MC-LR检测生物传感器及制备方法与应用

权利要求书

1.一种磁珠-DNA探针，其特征在于，所述磁珠-DNA探针由适配体Aptamer和其互补链Blocker结合得到的DNA双链Probe结合在链霉亲和素磁珠表面所构成，所述链霉亲和素磁珠为表面偶联有链霉亲和素的磁珠，所述适配体Aptamer的序列如SEQ NO.1所示，所述适配体Aptamer的5’端连接生物素-Biotin，所述互补链Blocker的序列如SEQ NO.2所示。

2.一种权利要求1所述的磁珠-DNA探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)将适配体Aptamer和互补链Blocker加入TAMg缓冲液中混合摇匀得反应液，将所述反应液95℃加热5min，然后逐渐冷却至4℃，形成DNA双链Probe；

b)将链霉亲和素磁珠溶液分散在2×BW缓冲溶液中，加入所述DNA双链Probe，室温孵育1h后，磁分离收集获得磁珠-DNA探针。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应液中，Aptamer的浓度为1v/v％，Blocker的浓度为1v/v％。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤b)中，链霉亲和素磁珠溶液、2×BW缓冲溶液和DNA双链Probe的体积比为1:50:50，其中，所述链霉亲和素磁珠溶液的浓度为30mg/mL。

5.一种MC-LR检测生物传感器，其特征在于，包括磁珠-DNA探针、Cas12a-crRNA复合物、信号链Reporter；

所述磁珠-DNA探针由适配体Aptamer和其互补链Blocker结合得到的DNA双链Probe结合在链霉亲和素磁珠表面所构成，所述链霉亲和素磁珠为表面偶联有链霉亲和素的磁珠，所述适配体Aptamer的序列如SEQ NO.1所示，所述适配体Aptamer的一端修饰有生物素Biotin，所述互补链Blocker的序列如SEQ NO.2所示；

所述Cas12a-crRNA复合物由crRNA和Cas12a孵育结合得到，所述crRNA的序列如SEQNO.3所示；

所述信号链Reporter一端为荧光素FAM，另一端为生物素BHQ1。

6.根据权利要求5所述的MC-LR检测生物传感器，其特征在于，所述Cas12a-crRNA复合物的制备方法为：将Cas12a溶液和crRNA溶液加入10×NEBuffer 2.1缓冲液中恒温孵育得到，其中，Cas12溶液的浓度为1μM，crRNA溶液的浓度为1μM，Cas12a溶液和crRNA溶液的体积比为1:2。

7.根据权利要求6所述的MC-LR检测生物传感器，其特征在于，所述Cas12a-crRNA复合物的制备方法中，恒温孵育的温度为37℃，恒温孵育的时间为10min。

8.权利要求5-7任一项所述的MC-LR检测生物传感器在MC-LR检测中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述MC-LR检测生物传感器的检测限度为0.000003μg/L。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述MC-LR检测为现场水样检测，所述现场水样检测具体为：用含MC-LR的水样与磁珠-DNA探针孵育后，所述磁珠-DNA探针上的互补链Blocker被竞争性释放后特异性地激活Cas12a-crRNA复合物的核酸酶活性，从而切割信号链Reporter，产生信号。