[发明专利]一种菌核青霉固体发酵产孢方法及其应用

权利要求书

1.一种菌核青霉固体发酵产孢方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）菌核青霉的活化

将菌核青霉接种到PDA培养基平板上，于10～40℃条件下进行活化培养；

（2）液体发酵培养

将步骤（1）中活化后的菌核青霉菌株的气生菌丝加入到表面活性剂溶液中混合均匀，然后接种到PDB液体培养基中，于100～220rpm，20～30℃条件下进行发酵培养，得到菌核青霉发酵液；

（3）固体发酵培养和孢子诱导

将步骤（2）中得到的菌核青霉发酵液倒入装有固体发酵培养基干培养料的可密封培养袋中，于密封、25～27℃条件下发酵培养3～5天，使菌丝长满固体发酵培养基；然后将可密封培养袋的封口打开，继续发酵培养5～7天，发酵期间每天揉搓菌块，防止成团，得到菌核青霉孢子；其中所述的固体发酵培养基干培养料为大米、玉米、小麦和糙米中的至少一种；

步骤（1）中所述的菌核青霉为菌核青霉（Penicillium sclerotiorum）SCAUMCX01，保藏编号为GDMCC No.60249；

步骤（3）中所述的固体发酵培养基干培养料的用量为按每克固体发酵培养基干培养料配比0.15～0.35 mL菌核青霉发酵液计算。

2.根据权利要求1所述的菌核青霉固体发酵产孢方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的固体发酵培养基干培养料为大米；

步骤（3）中所述的发酵培养的时间为5天；

步骤（3）中所述的继续发酵培养的时间为6天。

3.根据权利要求1所述的菌核青霉固体发酵产孢方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的表面活性剂为Tween20、Tween40、Tween60和Tween80中的至少一种；

步骤（2）中所述的表面活性剂溶液的浓度为体积百分比1‰；

步骤（2）中所述的表面活性剂溶液的用量为按每克菌核青霉菌株的气生菌丝0.8～1mL表面活性剂溶液计算。

4.根据权利要求1所述的菌核青霉固体发酵产孢方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的活化培养的温度为20～30℃；

步骤（1）中所述的活化培养的时间为5～7天；

步骤（2）中所述的发酵培养的转速为150r/min；

步骤（2）中所述的发酵培养的温度为25～27℃；

步骤（2）中所述的发酵培养的时间为3天以上；

步骤（3）中所述的可密封培养袋为食用菌培养袋。

5.根据权利要求1所述的菌核青霉固体发酵产孢方法，其特征在于，在步骤（3）之后还包括如下步骤：

（4）分离菌核青霉孢子粉

将步骤（3）中得到的菌核青霉孢子加入到表面活性剂溶液中，搅拌悬浮孢子，过滤，离心、取沉淀，冷冻干燥，得菌核青霉孢子粉。

6.根据权利要求5所述的菌核青霉固体发酵产孢方法，其特征在于：

步骤（4）中所述的表面活性剂为Tween20、Tween40、Tween60和Tween80中的至少一种；

步骤（4）中所述的表面活性剂溶液的浓度为体积百分比1‰；

步骤（4）中所述的过滤为采用纱布进行过滤；

步骤（4）中所述的离心的条件为：5000g离心30s。

7.权利要求1～6任一项所述的菌核青霉固体发酵产孢方法在制备菌核青霉孢子或孢子粉中的应用。

8.权利要求1～6任一项所述的菌核青霉固体发酵产孢方法制备的菌核青霉孢子或孢子粉在制备生物农药制剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的生物农药为菌核青霉孢子粉剂。