[发明专利]一种菌核青霉固体发酵产孢方法及其应用

说明书

本发明公开了一种菌核青霉固体发酵产孢方法及其应用。该方法包括如下步骤：(1)将菌核青霉接种到PDA培养基平板上进行活化培养；(2)将活化后的菌核青霉菌株的气生菌丝加入到表面活性剂溶液中，混匀后接种到PDB液体培养基中进行发酵培养，得到菌核青霉发酵液；(3)将菌核青霉发酵液倒入装有固体发酵培养基干培养料的可密封培养袋中，于密封、25～27℃条件下发酵培养3～5天；然后将可密封培养袋的封口打开，继续发酵培养5～7天，得到菌核青霉孢子；最后悬浮固体发酵培养基并过滤离心、冷干可获得菌核青霉孢子粉。本发明方法操作简便，通过闭口与敞口的调整诱导菌核青霉迅速产生大量孢子，适合规模化生产及应用。

技术领域

本发明属于微生物领域，特别涉及一种菌核青霉固体发酵产孢方法及其应用。

背景技术

生物农药一般是指自然界中存在的生物活体，如细菌、真菌、病毒等微生物或其产生的具有防治农业病、虫、草、鼠害作用的生物活性物质。相比化学农药对环境的污染与对农业生态系统平衡的破坏，生物农药具有以下三点明显优势：第一，选择性强，只作用于病虫害，对人、畜及农作物安全；第二，病虫害不易对其产生抗性；第三，生产方便，许多农副产品都可以作为原料，且采用普通发酵设备就能生产。随着生态农业和有机农业市场的不断发展，国内外愈发重视生物农药的研制和使用。

菌核青霉(Penicillium sclerotiorum)属子囊菌门(Ascomycota)，散囊菌纲(Eurotiomycetes)，散囊菌目(Eurotiales)，毛刷囊菌科(Trichocomaceae)，青霉属(Penicillium)，其菌落呈橘红色，分生孢子梗有横隔，顶端生有扫帚状分生孢子头，进行无性繁殖，产生近椭圆形分生孢子，孢子颜色为灰绿色。该菌于1935年首次从空气中分离得到，在环境中广泛存在，包括海洋、河流、土壤等。它可以提高作物的生物利用度，延缓衰老进程，促进植物生长，还可以强烈抑制植物寄生线虫与青枯菌，并对植物安全，是一种有效的生防真菌。

孢子粉剂是生物农药的重要形式，有助于推广应用，固体发酵符合上述要求，它指在没有或者只有少量自由水的存在下，在满足微生物生长代谢需求且具备一定湿度的固态营养基质中，进行一种或多种微生物发酵的过程。与传统的深层液体发酵工艺相比，固态发酵具有培养基含水量低，所需反应器体积小，产物浓度高，产品纯化费用低，无废水排放，污染物较少(属于清洁生产技术)，所需能耗少，培养基来源广泛等优势。但采用现有的常规固体发酵方法，存在孢子产量低、生产周期长，难以规模化生产的缺陷。因此，菌核青霉亟待一种操作简便、能控制杂菌污染、可保证孢子质量及产量、生产周期较短、成本较低的生产方法。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种菌核青霉固体发酵产孢方法。

本发明的另一目的在于提供所述菌核青霉固体发酵产孢方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种菌核青霉固体发酵产孢方法，包括如下步骤：

(1)菌核青霉的活化

将菌核青霉接种到PDA培养基平板上，于10～40℃条件下进行活化培养；

(2)液体发酵培养

将步骤(1)中活化后的菌核青霉菌株的气生菌丝加入到表面活性剂溶液中混合均匀，然后接种到PDB液体培养基中，于100～220rpm，20～30℃条件下进行发酵培养，得到菌核青霉发酵液；

(3)固体发酵培养和孢子诱导