[发明专利]马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途、外泌体及其提取方法和应用

说明书

本发明提供了一种马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途、外泌体及其提取方法和应用。本发明采用超速离心法从马氏珠母贝黏液中分离得到囊泡状纳米颗粒，并鉴定为外泌体，由此为从海洋生物中提取生物活性外泌体提供了参考，同时也提高了马氏珠母贝的利用价值。本发明从马氏珠母贝黏液中提取的外泌体能够增强细胞活力，降低细胞内ROS水平，抑制NF‑κB和NLRP3通路的激活，降低相关炎症因子mRNA的表达水平，具有一定的抗炎作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途、外泌体及其提取方法和应用。

背景技术

外泌体和细胞外囊泡是由脂质、蛋白质、核酸等生物因子组成的球形纳米颗粒，目前国际上对于细胞外囊泡和外泌体并没有明确的分类，通常情况下，将他们称为囊泡状纳米颗粒。作为一种细胞分泌的囊泡状纳米颗粒，外泌体可以在细胞之间传递物质信息，因此外泌体已被应用于多种疾病的治疗，如抗肿瘤、抗炎症及抗氧化等。由于外泌体是细胞产物，因此，与其他治疗方法相比，使用外泌体作为治疗方法具有更低的细胞毒性和更高的生物相容性。

外泌体分布在许多生物体的体液和细胞中，但大多数外泌体的分离来源主体仍然是人类细胞，如间充质干细胞。然而，人源细胞外泌体存在许多局限性，如分离产量低和分离成本高。因此，寻找新的外泌体来源来取代人类细胞来源外泌体显得尤为重要。有研究发现外泌体已从卷心菜中分离出来，并经过鉴定，它们具有相关抗炎特性，而在海洋生物中，也有报道发现从海参中分离出具有类似抗炎作用的细胞外囊泡。此外，有研究成功从鳕鱼黏液中分离和提取出外泌体，并发现它们含有免疫相关蛋白。然而，与人类和植物来源的外泌体相比，从海洋生物中提取外泌体的研究仍相对缺乏。

发明内容

本发明解决的问题是从海洋生物中提取一种新型的外泌体。

为解决上述问题，本发明第一方面提供一种马氏珠母贝黏液用于提取外泌体的用途。

本发明第二方面提供一种外泌体的提取方法，采用超速离心法和过滤方法从马氏珠母贝黏液中提取外泌体。

较佳地，所述采用超速离心法和过滤方法从马氏珠母贝黏液中提取外泌体包括：

对所述马氏珠母贝黏液进行过滤及初步离心处理，得到待提取液；

对所述待提取液进行超速离心处理，得到第二底部沉淀；

用缓冲液重新悬浮所述第二底部沉淀，所得重悬液即为所述外泌体。

较佳地，对所述待提取液进行两次所述超速离心处理得到所述第二底部沉淀，两次所述超速离心处理的离心力均为100000g。

较佳地，所述对所述待提取液进行两次所述超速离心处理包括：

将所述待提取液置于水平转子中，进行第一次超速离心处理70min，弃去上清液，得到第一底部沉淀；

对所述第一底部沉淀进行洗涤后，进行第二次超速离心处理90min，弃去上清液，得到所述第二底部沉淀。

较佳地，采用PBS溶液对所述第一底部沉淀进行洗涤。

较佳地，所述对所述马氏珠母贝黏液进行过滤及初步离心处理包括：

对所述马氏珠母贝黏液进行过滤后，得到滤液；

对所述滤液进行第一次离心处理和第二次离心处理，得到第一上清液，其中，所述第一次离心处理的离心力为500g，离心时间为10min，所述第二次离心处理的离心力为2000g，离心时间为10min；

对所述第一上清液进行第三次离心处理，得到的第二上清液即为所述待提取液，其中，所述第三次离心处理的离心力为10000g，离心时间为30min。

较佳地，所述缓冲液包括PBS溶液。