[发明专利]一种鉴定水稻Badh2基因型的引物组、方法和试剂盒

权利要求书

1.用于鉴定水稻Badh2基因型的引物组，包括

第一引物组，包括上游引物exon7-2-F：CTGGTAAAAAGATTATGGC和任选地选自以下的下游引物：

Xiang7R：CATCAAACACCACTATAGGAC；

intron7R：AACTGGCTACTAGAATGATG；

INTRON8R1：TCGTCTGGGACCAGTATTTC；或

INTRON8R2：CAGTACAAGATCTGCTCAA；或者

第二引物组，包括上游引物BADH2G-F：GCTTGCTGATGTGTGTAA；下游引物BADH2G-1R：TTTCCACCAAGTTCCAGT和下游引物badh2G-2R：GAGCAGCTGAAGCCATAA。

2.一种鉴定水稻Badh2基因型的方法，包括：

(1)提取水稻的DNA；

(2)使用根据权利要求1所述的引物组进行PCR扩增；和

(3)鉴定水稻Badh2基因型。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，用CTAB法提取水稻的DNA。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，PCR扩增的反应体系为10-50μL。

5.根据权利要求4所述的方法，其中当使用第一引物组且所述PCR扩增的反应体系为20μL时，所述反应体系包括50ng/μL的DNA模板0.1-2μL、10μM的上游引物0.2-1μL、10μM的下游引物0.2-1μL、10xBuffer 2μL、2.5mM dNTPs 1-2μL和5U/μL rTaq酶0.1-0.5μL，补充ddH₂O至20μL。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述PCR扩增的反应程序为94℃或95℃3-5min；94℃30s、50-60℃30s、72℃10-40s，共30-40个循环；72℃5-10min；

优选地，其中所述PCR扩增的反应程序为95℃5min；94℃30s、55℃30s、72℃40s，共30循环；72℃10min。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中产生扩增条带的样品是来自Badh2显性的样品，为非香稻；不产生扩增条带的样品是来自badh2隐性的样品，为香稻。

8.根据权利要求4所述的方法，其中，当使用第二引物组且所述PCR扩增的反应体系为20μL时，所述反应体系包括50ng/μL的DNA模板0.1-2μL、10μM的引物BADH2G-F 0.2-2μL、10μM的引物badh2G-2R 0.1-1μl，10μM的引物BADH2G-1R 0.1-1μl、10xBuffer 2μL、2.5mMdNTPs 1-2μL和5U/μL rTaq酶0.1-0.5μL，补充ddH₂O至20μL，并且反应体系中，引物BADH2G-F的浓度为引物badh2G-2R和BADH2G-1R的2倍。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述PCR扩增的反应程序为94℃或95℃3-5min；94℃或95℃30s、50-60℃30s、72℃10-40s，共30-40个循环；72℃5-10min；

优选地，其中所述PCR扩增的反应程序为95℃3min；95℃30s、50℃～58℃30s、72℃30s，共30个循环；72℃5min。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中产生两条扩增条带的样品是来自Badh2显性的样品，为非香稻；产生一条扩增条带的样品是来自badh2隐性的样品，为香稻。

11.一种用于鉴定水稻Badh2基因型的试剂盒，包括根据权利要求1所述的引物组。