[发明专利]新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 202210055361.0 | 申请日： | 2022-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN114317830A | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 王莉;赵志亮;刘芳;宋晓芸;高晓强;巩伟兵;王姣乐;高云新;罗永 | 申请（专利权）人： | 甘肃国际旅行卫生保健中心（兰州海关口岸门诊部） |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11;C12N15/50;C12R1/93 |
| 代理公司： | 焦作加贝专利代理事务所(普通合伙) 41182 | 代理人： | 任昕 |
| 地址： | 730020 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 新型 冠状病毒 数字 pcr 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：其包括数字PCR反应液、检测ORF1ab基因和N基因片段的引物及探针、阳性对照品和阴性对照品；
所述ORF1ab基因的检测引物正向序列为：SEQ ID NO.1，反向序列为：SEQ ID NO.2，探针序列为：SEQ ID NO.3；
所述N基因的检测引物正向序列为：SEQ ID NO.5，反向序列为：SEQ ID NO.6，探针序列为：SEQ ID NO.7。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述ORF1ab基因探针所使用的荧光报告基团为FAM，荧光淬灭基团为BHQ1。
N基因探针所使用的荧光报告基团为VIC，荧光淬灭基团为BHQ1；
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述ORF1ab基因的核苷酸序列为：SEQ ID NO.4。
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述N基因的核苷酸序列为：SEQ ID NO.8。
5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述数字PCR反应液的体积为25μL；
反应体系包括下列组分：
权利要求1所述的ORF1ab基因片段和N基因片段的引物对：正向引物和反向引物终浓度分别为10μmol/L；
ORF1ab基因和N基因的探针引物终浓度分别为10μmol/L；
2×反应缓冲液(含酶混合液)；
荧光素钠盐的终浓度为100μmol/L；
RNA模板及DEPC水。
6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品为商品化新型冠状病毒假病毒培养液。
7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述阴性对照品为DEPC水。
8.一种利用权利要求1-7所述的数字PCR检测试剂盒检测新型冠状病毒的方法，其特征在于：该方法中扩增程序为：50℃反转录10min；95℃预变性1min；95℃变性10s；57-60℃退火延伸30s。
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