[发明专利]LAMP检测OXA48家族基因的引物组合物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种LAMP检测耐碳青霉烯酶阴沟肠杆菌OXA48家族基因的引物组合物，其特征在于：所述的LAMP引物组合物包括：

正向外引物F3：如SEQ ID NO：1所示，

反向外引物B3：如SEQ ID NO：2所示；

正向内引物FIP：如SEQ ID NO：3所示；

反向内引物BIP：如SEQ ID NO：4所示；

正向环引物LF：如SEQ ID NO：5所示；

反向环引物LB：如SEQ ID NO：6所示。

2.一种用于检测耐碳青霉烯酶阴沟肠杆菌OXA48家族基因的LAMP试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1所述的LAMP检测耐碳青霉烯酶阴沟肠杆菌OXA48家族基因的引物组合物。

3.根据权利要求2所述的LAMP试剂盒，其特征在于：所述LAMP检测耐碳青霉烯酶阴沟肠杆菌OXA48家族基因的引物组合物包括0.2μM正向外引物F3，0.2μM反向外引物B3，1.6μM正向内引物FIP，1.6μM反向内引物BIP，0.4μM正向环引物LF，0.4μM反向环引物LB。

4.根据权利要求3所述的LAMP试剂盒，其特征在于：还包括LAMP反应扩增液。

5.根据权利要求4所述的LAMP试剂盒，其特征在于：所述LAMP反应扩增液包括0.2M甜菜碱、6mM MgSO4、1.4mM dNTPs、8U Bst DNA聚合酶、2.5μl的10×buffer、1μl模板DNA、0.05mM钙黄绿素、0.6mM MnCl2、7.1μl无菌ddH20。

6.一种LAMP检测耐碳青霉烯酶阴沟肠杆菌OXA48家族基因的方法，其特征在于，利用权利要求2-5任一项所述的LAMP试剂盒进行检测。

7.根据权利要求6所述的LAMP检测耐碳青霉烯酶阴沟肠杆菌OXA48家族基因的方法，其特征在于，按照如下的步骤顺序进行：

(1)在反应管中加入0.2μM正向外引物F3、0.2μM反向外引物B3、1.6μM正向内引物FIP、1.6μM反向内引物BIP、0.4μM正向环引物、0.4μM反向环引物、0.2M甜菜碱、6mM MgSO4、1.4mMdNTPs、8U Bst DNA聚合酶、2.5μl的10×buffer、1μl模板DNA、0.05mM钙黄绿素、0.6mMMnCl2、7.1μl无菌ddH20，并将反应管置于恒温水浴锅中；

(2)将步骤(1)的反应管置于冰盒上终止反应，根据反应管中颜色变化判断扩增结果。

8.根据权利要求6所述的LAMP检测耐碳青霉烯酶肠杆菌OXA48家族基因的方法，其特征在于：所述恒温水浴箱的温度63-67℃，反应时间为25-30分钟。

9.根据权利要求6所述的LAMP检测耐碳青霉烯酶肠杆菌OXA48家族基因的方法，其特征在于：所述恒温水浴箱的温度为65℃，反应时间为25-30分钟。