[发明专利]一种蛋白质热稳定性检测芯片的制备方法、检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种蛋白质热稳定性检测芯片，用于抗新冠药物的筛选，同时也可用于中药等靶点筛选，其特征在于，所述的蛋白质芯片中包括新冠病毒相关药物靶点蛋白的纯品；所述的靶点蛋白的保存液为含有10-30％甘油，pH＝6.7-7.5的磷酸盐缓冲液，所述的保存液中还包括防腐剂和信号增强剂；所述的热稳定性荧光信号信号增强剂为0.001-0.1％叠氮化钠。

2.根据权利要求1所述的蛋白质热稳定性检测芯片，其特征在于，所述的靶点蛋白包括经过网络药理学筛选相关的高频药物靶点，包含宿主来源和病毒来源两部分；所述的靶点蛋白包括：重组人蛋白ACE2、Cathepsin B(CTSB)、CD147、AXL、Anneixn A2、HMGB1、NFκB1(P50)、MAPK1、TAB1、重组病毒SARS-CoV-2Nucleocapsid Protein、Non-structuralprotein SARS-CoV-2NSP2、SARS-CoV-23C-like Proteinase。

3.根据权利要求2所述的蛋白质热稳定性检测芯片，其特征在于，所述的靶点蛋白用于热稳定性检测的序列进一步优化为SEQ ID NO.1-12。

4.根据权利要求3所述的蛋白质热稳定性检测芯片，其特征在于，所述的芯片中用于热稳定性检测的NFκB1(P50)蛋白终浓度为0.045-1μg/μL。

5.根据权利要求4所述的蛋白质热稳定性检测芯片，其特征在于，所述的ACE2、Cathepsin B(CTSB)、CD147、AXL、Anneixn A2、HMGB1、NFκB1(P50)、MAPK1、TAB1、重组病毒SARS-CoV-2Nucleocapsid Protein、Non-structural protein SARS-CoV-2NSP2、SARS-CoV-2 3C-like Proteinase的用于热稳定性检测时终浓度分别为0.045-1μg/μL。

6.根据权利要求2所述的蛋白质热稳定性检测芯片，其特征在于所述的靶点蛋白用于热稳定性检测时的纯度为90％及以上。

7.根据权利要求2所述的蛋白质热稳定性检测芯片，其特征在于其制备方法采用聚丙烯塑料多孔反应板，每孔放置2倍蛋白工作浓度的蛋白靶点于保存液中，4℃保存。

8.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-7任一项所述的蛋白质热稳定性检测芯片。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括样品稀释液和信号增强剂，所述的样品稀释液为含有10-30％甘油、pH＝6.7-7.5的0.01M磷酸盐缓冲液，所述的信号增强剂为0.01％的叠氮化钠。

10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，可用于有效中药复杂成分的抗新冠病毒作用靶点的直接筛选，其检测方法特征在于中药混合物复杂成分无需标记和分离，中药复杂成分检测经超滤去除蛋白，以靶点蛋白的热稳定性Tm数值变化判断是否为中药的靶点。