[发明专利]一种蛋白质热稳定性检测芯片的制备方法、检测方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种蛋白质热稳定性检测芯片的制备方法、检测方法和试剂盒，用于筛选作用于新型冠状病毒(新冠病毒)靶点蛋白的药物和临床有效药物的作用靶点筛选。所述的蛋白质芯片热稳定性检测中包括新冠病毒的潜在靶点蛋白的种类包括：重组人蛋白ACE2、Cathepsin B(CTSB)、CD147、AXL、Anneixn A2、HMGB1、NFκB1(P50)、MAPK1、TAB1、重组病毒蛋白SARS‑CoV‑2Nucleocapsid Protein、Non‑structural protein SARS‑CoV‑2 NSP2、SARS‑CoV‑2 3C‑like Proteinase，所述试剂盒还包括：样品稀释液、对照品等。本发明试剂盒填补行业空白，解决现实需求，具有通量高、简便快捷、无需标记、产品稳定的特点，数据真实可靠，对新冠病毒科研可能起到推动作用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒药物靶点蛋白质稳定性高通量检测芯片以及试剂盒。

背景技术

蛋白质参与疾病的发生和发展过程，可以作为疾病靶标来开发特异性药物起到治疗的效果。以蛋白质作为药物靶点的药物筛选方法有很多种，例如基于SP R(SurfacePlasmon Resonance)技术、等温滴定量热技术ITC(Isothermal titra tion calorimetry)等，但是这些方法也存在缺点。首先，检测通量低，每次(批) 只能检测少数样本；其次，仪器设备造价高，属于专用设备，不具有通用性。

中药具有组方快，副作用小的特点，在面对新型冠状病毒早期可以快速应用救治患者。中药具有先临床应用后药理研究的特点，目前一些疗效确切的中药和天然产物缺乏相关的靶点研究工具。

现有技术中目前没有直接检测蛋白质与药物相互作用且可以实时检测的基于蛋白热稳定性原理的蛋白质芯片，也没有针对新型冠状病毒的药物靶点作用分子筛选的蛋白质芯片和试剂盒。研究与开发新的使用方便、高通量、可实时监测的检测蛋白质与药物分子相互作用的方法和产品，是解决上述问题的关键。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种基于蛋白质热稳定性的蛋白质芯片并进行了条件优化和针对新冠病毒靶点的试剂盒建立，可以实现在常规PCR仪器上实现高通量非标记的新冠病毒靶点药物筛选。

本发明基于蛋白质热稳定性，利用蛋白质热转移分析去开发新的高通量检测产品和试剂盒。分子(此处包含蛋白、抗体、小分子药物、中药复杂成分体系) 与蛋白发生相互作用时，蛋白质的构象大多会发生变化，进而其稳定性就会发生改变。蛋白质热转移分析是基于蛋白质结构的疏水性部位随着温度的上升，逐渐暴露出来的原理，通过荧光素与蛋白质疏水性部分的结合，以荧光量随温度上升而变化的曲线形式，揭示特定蛋白质在稳定性上的特性。目前针对蛋白热稳定性检测的产品和技术都是单通道的，尚没有实现高通量的检测，疾病的治疗靶点往往是众多的，这使得该方法无法进行多靶点的高通量的药物筛选和未知靶点药物的靶点筛选。

基于上述问题和科学原理，本专利首次提出一种结合蛋白质热稳定性分析和生物芯片原理的筛选新型冠状病毒药物靶点相关分子的蛋白质热稳定性检测芯片和试剂盒。常规的蛋白质热稳定性是单通道的，据蛋白靶点与药物反应前后热稳定曲线的变化差异，可以判断蛋白是否与药物存在相互作用。本试剂盒新创、优化了制备和检测条件，提高了新冠病毒相关蛋白靶点热稳定性检测的速度和通量。

一方面，本发明提供了一种蛋白质热稳定性检测芯片。

所述的蛋白质热稳定性检测芯片为高通量靶点蛋白质热稳定性检测芯片。

所述的蛋白质热稳定性检测芯片用于筛选作用于新冠病毒靶点蛋白的药物和未知靶点药物的靶点筛选。

所述的蛋白质热稳定性检测芯片中包括新冠病毒的潜在靶点蛋白的纯品。

所述的靶点蛋白包括经过网络药理学筛选相关的高频药物靶点，包含宿主来源和病毒来源两部分。