[发明专利]基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1.基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条，包括外壳（8）和配套使用的样品稀释液，外壳（8）内装配有试纸条，试纸条包括PVC底板（2），PVC底板（2）上黏贴有样品垫（1）、金标垫（3）、包被膜（6）和吸水垫（7），其特征在于：金标垫（3）为玻璃纤维素膜，包被有纯化的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体与胶体金的偶联标记物；包被膜（6）为硝酸纤维素膜，包被膜（6）上涂设有一条包被有纯化抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的检测线（4）和一条包被有羊抗鼠IgG抗体的质控线（5）；

抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条，其特征在于：样品稀释液包括基液，基液中加入有质量百分数为0.05%的NaN₃和0.05%的PEG20000，基液中还加入有体积百分数为0.5%的Tween-20；

基液为PBS溶液，PBS溶液的浓度为0.01mol/L，PBS溶液的pH值为7.2。

3.如权利要求1-2任一项所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、胶体金溶液的制备：取浓度为0.01%的氯金酸溶液，加热至沸腾后，迅速加入浓度为1%的柠檬酸三钠1.5mL并继续加热，溶液由淡黄色转为蓝黑色，最终变为酒红色，颜色稳定后继续加热5分钟，在室温进行冷却，获得胶体金溶液，4℃保存备用，胶体金颗粒的直径为25nm；

S2、蛋白标记：采用浓度为1%的K₂CO₃溶液调节胶体金溶液的pH值为7.2；然后在每1mL胶体金溶液中加入10μg抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体，室温震荡30分钟，震荡速度为130r/min；然后加入浓度为10%的牛血清白蛋白20μL进行封闭，静置30分钟；静置完成后离心40分钟，离心速度为12000r/min，弃上清，按胶体金溶液体积1/10的比例加入复溶液溶解沉淀，即得到标记好的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体标记物；

S3、金标垫的制备：选取玻璃纤维素膜作为金标垫（3），每条玻璃纤维素条中加入1mL的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体标记物，进行烘干工序，即得到金标垫（3）。

4.根据权利要求3所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法还包括：

S4、包被膜的制备：选择硝酸纤维素膜作为包被膜（6），将抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体用划膜液稀释至浓度为1mg/mL，用于检测线（4）划线；将羊抗鼠IgG抗体用划膜液稀释至浓度为1mg/mL，用于质控线（5）划线；采用三维划膜喷金仪以1μL/cm的浓度在硝酸纤维素膜上进行检测线（4）和质控线（5）的划线，后经烘干工序获得包被膜（6）；

S5、样品垫处理：选择玻璃纤维素膜作为样品垫（1），将样品垫（1）放入样品垫处理液中浸泡30分钟，而后在37℃的环境中烘干过夜。

5.根据权利要求4所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法还包括：S6、样品稀释液制备：样品稀释液的配方包括基液，基液中加入有质量百分数为0.05%的NaN₃和0.05%的PEG20000，基液中还加入有体积百分数为0.5%的Tween-20；

基液为PBS溶液，PBS溶液的浓度为0.01mol/L，PBS溶液的pH值为7.2。

6.根据权利要求5所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法还包括：S7、检测试纸条的组装：将包被膜（6）、金标垫（3）、样品垫（1）和吸水垫（7）依次贴于PVC底板（2）上制得试纸条，将试纸条装入外壳（8）中，获得基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条；

S8、包装：将组装好的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条连同干燥剂装入铝箔袋中密封，贴签，而后将样品稀释液管放入外包装盒内。