[发明专利]一种降低或消除重组蛋白CEX酸性峰的方法

权利要求书

1.一种降低或消除重组蛋白阳离子交换色谱（CEX）酸性峰的方法，其特征在于将已经过纯化、CEX鉴定仍存在酸性峰的重组蛋白进一步采用以NM90-Agarose^TMHAM为填料的复合型离子交换层析进行分离，载量≤60 mg/mL，洗脱pH为pH 4.75±0.05，去除所述重组蛋白的酸性变异体；

其中，所述重组蛋白分子中含有GS连接子，所述重组蛋白的酸性变异体是由所述GS连接子丝氨酸残基上以木糖为核心的O-糖基化修饰产生的-Xyl(PO3)-Gal-Gal-GlcA结构和-Xyl(PO3)-Gal结构，所述重组蛋白包含有如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述降低或消除重组蛋白阳离子交换色谱（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述GS连接子由式(GS)n表示，其中n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。

3.如权利要求1所述降低或消除重组蛋白阳离子交换色谱（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述GS连接子由式(GGGGS)n表示，其中n为1、2、3、4或5。

4.如权利要求1所述降低或消除重组蛋白阳离子交换色谱（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重组蛋白包括一个或多个选自下组的元件：Fc、F(ab’)2、Fab、ScFv、sdAb。

5.如权利要求1所述降低或消除重组蛋白阳离子交换色谱（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重组蛋白为重组抗NKG2A/PD-L1双特异性抗体。

6.如权利要求1所述降低或消除重组蛋白阳离子交换色谱（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重组蛋白是由哺乳动物细胞系统表达，所述纯化包括亲和层析纯化。

7.如权利要求1所述降低或消除重组蛋白阳离子交换色谱（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重组蛋白是以CHO为宿主细胞表达、经过亲和层析纯化的重组双特异性抗体。

8.复合型离子交换层析在去除重组蛋白的酸性变异体中的应用，其中，所述重组蛋白的酸性变异体是由丝氨酸残基上以木糖为核心的O-糖基化修饰产生的-Xyl(PO3)-Gal-Gal-GlcA结构和-Xyl(PO3)-Gal结构，所述复合型离子交换层析采用NM90-Agarose^TMHAM作为填料。