[发明专利]一种二氧化碳抑制腐败希瓦氏菌致腐性能的测试方法

说明书

一种二氧化碳抑制腐败希瓦氏菌致腐性能的测试方法，按以下步骤进行：（1）活化菌液；（2）制备菌悬液；（3）准备并处理试样；（4）接菌处理；（5）包装入袋；（6）气调包装；（7）冰箱冷藏；（8）性能测试：分别在贮藏0~18天后随机取三份样品作为平行组，对平行组进行检测，测试不同CO₂浓度的保鲜气体条件下对腐败希瓦氏菌致腐性能的抑制效果。本发明的测试方法证明CO₂能够有效降低腐败希瓦氏菌的生长繁殖速率和对接菌处理试样的腐败降解能力，延缓了腐败希瓦氏菌对水产品食材品质的破坏速率，同时CO₂安全环保、生产成本相对较低，是一种极具商业价值的抑制腐败希瓦氏菌致腐性能的手段。

技术领域

本发明属于防腐技术领域，特别涉及一种二氧化碳抑制腐败希瓦氏菌致腐性能的测试方法。

背景技术

腐败希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）是鱼虾贝等新鲜水产品的典型腐败菌（specific spoilage organism, SSO）；在水产品冷藏期间，腐败希瓦氏菌能够还原氧化三甲胺并产生H₂S气体，导致水产品产生酸臭腐败味；同时腐败希瓦氏菌分泌的胞外蛋白酶能够降解蛋白质等营养成分，造成水产品营养品质的破坏和风味品质的劣变。腐败希瓦氏菌生长繁殖能够产生生物被膜，而生物被膜无论在干燥条件或使用抗生素条件下均能够产生一定的抵抗能力，极难被彻底清除，成为持续的再污染源。食品加工设备上的生物被膜会造成加工过程中能量的损失，降低热传导效率，影响生产效率，并造成加工设备的腐蚀；而水产品贮藏过程中腐败希瓦氏菌增殖形成生物被膜，将加剧其对水产品的致腐作用，给水产品加工与贮藏带来严重危害。因此抑制腐败希瓦氏菌的生长繁殖及致腐性能是改进水产品加工与贮藏表现的关键问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种二氧化碳抑制腐败希瓦氏菌致腐性能的测试方法，将腐败希瓦氏菌反接到无菌大黄鱼片后分别贮藏于不同浓度的CO₂环境中，通过检测腐败希瓦氏菌生长变化情况和大黄鱼蛋白质品质变化情况，测试不同贮藏条件下腐败希瓦氏菌生长繁殖速率，证明如何有效降低腐败希瓦氏菌的生长繁殖速率和致腐性能。

本发明的方法按以下步骤进行：

（1）活化菌液：将冷冻保存的腐败希瓦氏菌种取出解冻，然后加入到胰蛋白胨大豆肉汤（trypticase soy broth，TSB）培养基中，摇床震荡培养10~14 h，获得一次培养液；

（2）制备菌悬液：将一次培养液接种到液体培养基中，再次摇床震荡培养4~8 h，制成细菌浓度为10⁶~10⁸ CFU/mL的菌悬液；

（3）准备并处理试样：准备水产品食材进行处理后，切成若干个质量为80~120 g的片状食材，然后用0~4℃的水洗净并沥干，制成试样；

（4）接菌处理：将若干个试样浸入乙醇溶液中20~40s，然后取出，用无菌蒸馏水洗涤2~4次，再用紫外线杀菌15~25 min，获得若干个杀菌试样；稀释菌悬液至细菌浓度为10³~10⁵ CFU/mL，然后用稀释后的菌悬液对杀菌试样进行接菌处理，获得若干个接菌处理试样；

（5）包装入袋：将若干个接菌处理试样分别装入气调包装袋中；

（6）气调包装：启动袋式气调包装机并启动真空泵，采用气调包装模式进行包装；包装时的保鲜气体中CO₂的体积百分比为0~100%，其余为N₂；

（7）冰箱冷藏：完成包装的接菌处理试样置于冰箱中，在4.0± 0.5℃条件下贮藏；

（8）性能测试：将完成包装的接菌处理试样作为样品；分别在贮藏0~18天随机取三份样品作为平行组，对平行组进行检测，测试不同CO₂浓度的保鲜气体条件下对腐败希瓦氏菌致腐性能的抑制效果。

上述的步骤（1）中，冷冻保存的温度≤-80℃。