[发明专利]一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

a.供试品溶液的制备：取寒热痹胶囊内容物，研细，取约1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～50mL，称取重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

b.对照品溶液的制备：分别精密称取芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成质量浓度分别为0.01、0.15、0.02、0.005、0.01、0.02、0.04、0.01mg/mL的混合对照品溶液，作为对照品溶液；

c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μL，注入高效液相色谱仪，记录125分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得寒热痹胶囊的指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01-0.3％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5～1.5mL/min，柱温25-45℃，检测波长210～360nm；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于4000。

3.根据权利要求1所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

a.供试品溶液的制备：取寒热痹胶囊内容物，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称取重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

b.对照品溶液的制备：分别精密称取芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，分别置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；再分别精密吸取对照品储备液0.3、5、0.5、0.3、0.5、1、1、0.3mL置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.01064、0.15565、0.01801、0.00576、0.01660、0.01982、0.03827、0.01191mg/mL的混合对照品溶液，作为混合对照品溶液；

c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录125分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得寒热痹胶囊的指纹图谱。

4.根据权利要求3所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为：ShimadzuC₁₈ 250×4.60mm；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于4000。

5.根据权利要求2或4所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0-10min，1％A；10-25min，1-12％A；25-45min，12-15％A；45-55min，15％A；55-70min，15-20％A；70-85min，20-30％A；85-115min，30-60％A；115-125min，60-70％A。