[发明专利]一种手性止血多肽及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种手性止血多肽及其制备方法与应用，该手性止血多肽的结构式如式(Ⅰ)所示。其制备方法包括：树脂的活化，氨基酸的耦联，多肽的切除和沉淀，多肽的分离纯化。本发明制得的手性止血多肽有良好的生物相容性，不会引起伤口部位的炎性反应，具有结合钙离子的功能，且在止血与骨再生等方面表现出优异的效果。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种手性止血多肽及其制备方法与应用。

背景技术

牙拔除术后出血是口腔临床工作中最常见的并发症，大多因局部因素引起，如处理不及时可导致严重的并发症。填塞法是最常见的拔牙窝出血处理方式，合理使用局部止血材料充填拔牙窝是治疗及预防拔牙后出血的重要措施。传统拔牙窝止血材料-碘仿纱条是早年常用的止血材料，但因其不可降解，需二次手术取出延迟拔牙窝愈合，已逐渐被淘汰。

常用的止血材料包括明胶海绵、纤维蛋白胶和医用胶原蛋白。因明胶海绵价格低廉，是临床上常用的拔牙后止血填充材料。但明胶海绵易软化，不适合用于拔牙窝大量出血，易被血液冲出，无法达到止血效果。纤维蛋白胶是从人或哺乳动物血浆制备而来，主要成分是黏蛋白和凝血酶浓缩物，通过高浓度的纤维蛋白原及凝血因子模拟机体凝血过程形成纤维蛋白膜达到止血作用，且可用于凝血功能障碍的患者，但由于其是血液制品存在诱发免疫反应风险。医用胶原蛋白是胶原蛋白制作的胶原塞，通过吸收水分或血液后可膨胀，能粘附于组织表面，达到止血效果。在出血量较大的情况下，胶原塞也不易软化。尽管上述临床上使用的止血材料充填及覆盖拔牙窝后均有一定的止血效果，然而在预防及快速控制失血方面尚存在不足。

随着研究发现，近年研究人员利用自组装多肽水凝胶在大组织器官损伤止血方面取得一定成效，如肝外伤止血、心脏穿透止血，因其不用缝合且具有良好生物相容性和安全性，作为止血材料具有独特地优势。自组装多肽水凝胶原理是通过多肽在疏水作用、静电作用和氢键结合等非共价弱相互作用的驱动下，自组装多肽可以在出血部位凝胶化，进而显著减少失血。这种由弱相互作用驱动的自我组装成特定的网络纳米结构形成物理屏障，但微弱的闭合体间相互作用使得它们较脆弱。同时，自组装多肽水凝胶能否用于口腔拔牙止血也难以预期。

现有临床上常用拔牙窝止血材料，如明胶海绵和医用胶原蛋白，大都通过机械压迫方式借助材料吸血膨胀，粘附，凝血，达到止血效果。尽管上述材料都具有一定的止血功效，但是部分止血材料对大量出血或凝血功能障碍无效，且止血材料本身缺少与机体相互作用机制，不能达到快速止血效果。而现有的自组装多肽水凝胶，多肽由于其特殊的分子结构，容易被蛋白酶识别和水解，难以兼顾稳定性与功效性。

发明内容

本发明目的在于解决现有的明胶海绵、纤维蛋白胶、医用胶原蛋白、自组装多肽水凝胶等止血材料存在的止血速度缓慢、止血效果不佳、功能相对单一、难以兼顾稳定性与功效性等问题。

基于上述目的，本发明提供了以D型氨基酸为原料的一种手性止血多肽来解决本领域内的这种需要。

一方面，本发明涉及一种手性止血多肽，一种手性止血多肽结构式如式(Ⅰ)所示：

另一方面，本发明涉及一种手性止血多肽的制备方法，其包括：

树脂的活化：DMF浸泡溶胀树脂30min，去除液体后，采用DMF和DCM交替洗涤2次，然后用DMF洗涤2次，每次洗涤时间为30s。；

氨基酸的耦联：依照式(Ⅰ)所示多肽结构式的氨基酸序列，将D型氨基酸经HBTU/HOBT、DIEA活化后加入树脂，从C端至N端进行顺序反应得到含多肽的树脂；

多肽的切除和沉淀：将所述含多肽的树脂置于切割液中2～3h，经冰乙醚沉淀，50％乙腈水重悬，0.45μM滤膜过滤，得到多肽粗品；所述切割液以1mL去离子水计，包含1mL去离子水、17.6mL TFA、0.4mL Tips和0.7g苯酚；