[发明专利]一种重组海藻糖酶的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种重组海藻糖酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)以大肠杆菌BL21基因组为模板，PCR扩增海藻糖酶编码基因trl，获得trl基因片段；所述海藻糖酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述PCR扩增的引物如SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3所示；

(2)将trl基因片段和pXMJ19质粒采用HindIII和EcoRI限制性内切酶双酶切并连接，连接产物电击转化E.coli DH5α感受态，获得重组表达质粒pXMJ19-trl；

(3)采用重组表达质粒pXMJ19-trl电击转化谷氨酸棒杆菌ATCC13032，获得重组谷氨酸棒杆菌；

(4)对重组谷氨酸棒杆菌进行诱导培养，使重组海藻糖酶在细胞中合成并积累，然后收集细胞，破碎并离心，获得含重组海藻糖酶的酶液。

2.如权利要求1所述重组海藻糖酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述电击转化的条件为：1800V，5ms。

3.如权利要求1或2所述重组海藻糖酶的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述诱导培养的条件为：IPTG诱导浓度为0.5mM，诱导温度为22-30℃，诱导时间为10-15h。

4.权利要求1或2或3所述方法制备的重组海藻糖酶在海藻糖含量检测中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用方法为：将待测样品稀释至海藻糖浓度为0.125～2g/L，添加海藻糖酶4000U/L，45℃反应5min，通过分析葡萄糖浓度的增加量计算出样品中海藻糖浓度。