[发明专利]一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途

权利要求书

1.一种苦荞活性肽，其特征在于：所述苦荞活性肽的氨基酸序列为：Lys-Leu-Arg-Pro-Leu-Gln-Val-Leu。

2.权利要求1所述苦荞活性肽在在制备治疗肝损伤药物中的应用。

3.权利要求1所述苦荞活性肽在制备治疗酒精性肝损伤药物中的应用。

4.权利要求1所述苦荞活性肽在制备保肝护肝功能食品或保健品中的应用。

5.权利要求1所述苦荞活性肽的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

（1）以苦荞为原料，经酱油曲霉固态发酵后超声提取制备得苦荞活性肽粗液；

（2）采用截留分子量为5000Da的超滤膜对苦荞活性肽粗液进行超滤，收集小于5000Da的超滤液冷冻干燥，备用；

（3）以水为流动相，采用葡聚糖凝胶对步骤（2）得到的苦荞活性肽进行粗分；

（4）利用高效液相色谱技术对步骤（3）得到的粗分产物进一步分离，多次收集合并，冷冻干燥备用；

（5）将步骤（4）收集的苦荞活性肽复溶，经Q-ExactiveLC-MS/MS进行序列鉴定后进行初步筛选，根据测序结果选择含亮氨酸、脯氨酸和丙氨酸三种氨基酸中两种及以上的肽序列；

（6）将步骤（5）所得的肽与乙醇氧化酶分子对接后再次筛选进行合成；

（7）将合成后的肽经体外抗氧化抗炎活性测定，选取活性最好的肽即为所述苦荞活性肽。

6.根据权利要求5所述苦荞活性肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）中酱油曲霉固态发酵具体过程为：将10-20g苦荞粉经高压灭菌后加入1-3mL的酱油曲霉孢子悬液（2×10⁷个/mL）和2-10mL无菌水，搅拌均匀后放入温度为20-40℃、湿度为60%-90%的环境中培养20-40h；发酵结束后向发酵罐中加入20-60mL无菌水，超声提取10-40min，离心取上清液，即为苦荞粗溶液，酱油曲霉孢子悬液中酱油曲霉孢子的含量为2×10⁷个/mL。

7.根据权利要求5所述苦荞活性肽的制备方法，其特征在于：步骤（4）中所述的高效液相色谱的分离条件为：

色谱柱：Angilent Eclipse XDB-C18柱；

流动相:A液：0.1％三氟乙酸-水溶液；B液：0.1％三氟乙酸-乙腈溶液；

采用线性梯度洗脱：0-10min，10％～30％的B液；10～30min，30％～50％的B液；30-50min，50-80%的0.1％B液；

流速为0.6mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm。

8.根据权利要求5所述苦荞活性肽的制备方法，其特征在于：步骤（4）中所述Q-ExactiveLC-MS/MS分离条件为：

色谱柱：Angilent Eclipse XDB-C18柱；

流动相：A液：0.1％甲酸水；B液：纯乙腈；

采用线性梯度洗脱：0-10min，5％～25％B液；10～40min，25％～75％B液；

流速为0.3mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm。