[发明专利]一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途

说明书

本发明公开一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途，即苦荞活性肽在防治酒精性肝病药物、食品和保健食品的应用。该苦荞活性肽的肽序为Lys‑Leu‑Arg‑Pro‑Leu‑Gln‑Val‑Leu，制备方法包括：以苦荞为原料经酱油曲霉固态发酵、超声处理后得苦荞活性肽粗溶液，依次进行超滤处理、葡聚糖凝胶色谱柱分离和高效液相色谱柱纯化，经Q‑ExactiveLC‑MS/MS进行序列鉴定后初步筛选，筛选后的肽与乙醇氧化酶分子对接后再次筛选进行合成，经体外抗氧化抗炎活性测定后选取活性效果最好的一种肽。经过研究发现所述的苦荞活性肽用于对酒精性肝病的治疗。

技术领域

本发明涉及一种苦荞活性肽及其制备方法和新用途，尤其涉及一种苦荞活性肽及其制备和在治疗酒精性肝病药物中的应用，属于食品与医药技术领域。

背景技术

酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是长期过量饮酒引起的慢性肝病。在全世界范围内,酒精性肝病即病毒性肝炎之后,成为肝脏损害的第二大主要病因。近年来我国酒精性疾病发病率呈增长趋势,严重影响患者日常生活、工作,对其生命健康造成威胁。目前对于酒精性肝病无特效药物，主要治疗仍以戒酒为主。

苦荞(Fagopyrum tataricum)起源于中国和亚洲北部地区，为蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum)一年生双子叶作物，具有生育期短、耐冷凉、耐贫瘠、适应性较强等特点，常作为山区、丘陵区轮作换茬的重要作物之一；苦荞含有丰富的营养和保健成分，尤其是在预防糖尿病、高血糖、高血脂等方面有重要作用；其中，苦荞的蛋白质含量为13.4%，富含赖氨酸、苯丙氨酸等多种必需氨基酸，是一种营养均衡的蛋白质，可以很好地为人体所利用。有研究发现苦荞蛋白具有降低胆固醇、降血脂、抗衰老、抑制乳腺癌的发生、抑制胆结石等作用；但是将苦荞活性肽用于治疗酒精性肝病尚未被报道。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，本发明的目的一在于提供具有新型氨基酸序列的苦荞活性肽，所述苦荞活性肽的氨基酸序列为：Lys-Leu-Arg-Pro-Leu-Gln-Val-Leu，经动物试验发现，该苦荞活性肽能够显著减轻酒精导致的肝损伤，可用于制备治疗酒精性肝病的药物。

本发明的目的二在于提供所述苦荞活性肽在制备治疗肝损伤药物中的应用。

本发明的目的三在于提供所述苦荞活性肽在制备保肝护肝功能食品或保健品中的应用。

本发明的目的四在于提供所述苦荞活性肽的制备方法，具体包括以下步骤：

（1）以苦荞为原料，经酱油曲霉固态发酵后超声提取制备得苦荞活性肽粗液。

（2）采用截留分子量为5000Da的超滤膜（例如中空纤维聚砜超滤膜）对苦荞活性肽粗液进行超滤，收集小于5000Da的超滤液冷冻干燥，备用。

（3）以水为流动相（流速优选0.3mL/min），采用葡聚糖凝胶（例如G25凝胶）对步骤（2）得到的苦荞活性肽进行粗分。

（4）利用高效液相色谱技术对步骤（3）得到的粗分产物进一步分离，多次收集合并，冷冻干燥备用。

（5）将步骤（4）收集的苦荞活性肽复溶，经Q-ExactiveLC-MS/MS进行序列鉴定后进行初步筛选，根据测序结果选择含亮氨酸、脯氨酸和丙氨酸三种氨基酸中两种及以上的肽序列。

（6）将步骤（5）所得的肽与乙醇氧化酶分子对接后再次筛选进行合成。

（7）将合成后的肽经体外抗氧化抗炎活性测定，选取活性最好的肽即为所述苦荞活性肽。