[发明专利]多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合、试剂盒及检测方法，涉及分子生物学检测技术领域。其中，包括48条扩增引物和24条质量探针延伸引物，通过多重PCR技术与MALDI‑TOF技术联用，能够实现对多种呼吸道病毒的分型鉴定。检测通量高，更适合于大规模的病原体筛查。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域。更具体地，涉及一种多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合、试剂盒及检测方法。

背景技术

能够引起人类呼吸道感染的病原体种类多样，病毒是一个重要致病因素，约有80％的呼吸道感染由呼吸道病毒引起的。这一系列病毒种类繁多，其中最常见，最具有代表性的包括：正黏病毒科(Orthomyxoviridae)的流感病毒(influenzaviruses，IFVs)，副黏病毒科(Paramyxoviridae)的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)，副流感病毒(parainfluenzaviruses，PIVs)，人偏肺病毒(humanmetapneumovims，HMPV)，小RNA病毒科(Picornaviridae)的人鼻病毒(huamnrhinoviruses，HRVs)，冠状病毒科(Coronaviridae)的人冠状病毒(human coronaviruses，HCoVs)，腺病毒科(Adenoviridae)的腺病毒(adenoviruses，ADVs)，以及细小病毒科(Parvoviridae)的人博卡病毒(humanbocavirus，HBOVs)。虽然呼吸道病毒的种类繁多，但其感染有着类似的特点。首先，呼吸道病毒的传染性都很强，非常容易在人群聚集的场所，如学校、医院传播。其次，呼吸道病毒感染引起的症状不特异，大多呈现为上呼吸道感染的症状，如普通感冒、咽喉炎等。第三，人群对于呼吸道病原体普遍易感，病毒变异速度快，由疫苗获得的免疫力并非长久有效，呼吸道感染容易反复发生。尤其2019新型冠状病毒传染性强，传播速度快，特别是免疫力低下者，如老年人，免疫抑制，基础病患者，有时更容易形成继发感染，对肺部及其他器官造成重大损伤，发展成重症，甚至危及生命。

对呼吸道病毒进行核酸检测，目前的主要方法是荧光定量RT-PCR方法。但是由于荧光通道的限制，一次只能检测1-2种病毒，而且每次的样本检测通量低，不利于临床快速准确大规模的进行病例筛查；NGS高通量测序也是检测病毒的一种重要技术，通过全测序可以实现病毒及亚型的准确鉴定，但是实验操作复杂，整体流程时间长，样本检测成本升高。因此对于呼吸道病原体的检测，必须要综合考虑检测重数与检测通量。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种用于多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合及包含这些引物组合的检测试剂盒，提高对呼吸道病毒的筛查诊断能力。

本发明的另一个目的在于提供一种利用上述试剂盒进行多种呼吸道病毒核酸质谱检测的方法。该方法使得呼吸道病毒检测特异性强，灵敏度高。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合，包括48条扩增引物和24条质量探针延伸引物，其中，扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1-48所示，具体见表1；质量探针延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID No.49-72所示，具体见表2。

表1扩增引物序列

表2质量探针延伸(MPE)引物序列