[发明专利]来源于深海细菌的α-葡萄糖苷酶QsGH13的三维结构及其晶体制备和应用

权利要求书

1.来源于深海细菌Qipengyuania seohaensis sp.SW-135的α-葡萄糖苷酶QsGH13晶体，其特征在于，其参数为：

晶体结构空间群：P 2₁ 2₁ 2₁ ；

晶胞参数：a=58.816 Å，b=129.920 Å，c=161.307 Å，α=γ=β=90°；

I/σ (I)：14.36 ；

Rwork/ Rfree：0.2112 /0.2678；

分辨率范围（Å）：50.00-2.20 ；

数据完整性（%）：99.40 ；

所述α-葡萄糖苷酶QsGH13的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的晶体，其特征在于，深海细菌Qipengyuania seohaensissp.SW-135的α-葡萄糖苷酶QsGH13的晶体三维结构中，一个晶体学不对称单位有两个蛋白分子，被称为A链与B链。每个分子由20个β链和19个α螺旋组成。具体组成如下：折叠1，即含Ala11-Ile16的氨基酸区段，α螺旋1，即含Asp31-Gly46氨基酸区段，β折叠2，即含Asp48-Ser53的氨基酸区段，β折叠3，即含Phe55-Lys57的氨基酸区段，β折叠4，即含Asp69-Asp74的氨基酸区段，α螺旋2，即含 Pro75-Gly78的氨基酸区段，α螺旋3，即含Thr79-Leu93的氨基酸区段，β折叠5，即含Lys96-Gln101的氨基酸区段，α螺旋4，即含His110-Arg117的氨基酸区段，β折叠6，即含Val129-Ala131的氨基酸区段，β折叠7，即含Ala151-Asp155的氨基酸区段，β折叠8，即含Gln160-His164的氨基酸区段，α螺旋5，即含Asn177-Glu193的氨基酸区段，β折叠9，即含Asp197-Asp202的氨基酸区段，α螺旋6，即含Ala203-Ala207的氨基酸区段，α螺旋7，即含Arg228-Phe232的氨基酸区段，α螺旋8，即含Asp243-Asp256的氨基酸区段，β折叠10，即含Phe262-Val267的氨基酸区段，α螺旋9，即含Asp271-Phe279的氨基酸区段，β折叠11，即含Asn287-Tyr290的氨基酸区段，α螺旋10，即含Thr301-Glu311的氨基酸区段，β折叠12，即含Trp320-Trp323的氨基酸区段，α螺旋11，即含Ala333-Cys338的氨基酸区段，α螺旋12，即含Thr339-Leu357的氨基酸区段，β折叠13，即含Asn360-Tyr365的氨基酸区段，α螺旋13，即含Gly366-Gly370的氨基酸区段，α螺旋14，即含Asp383-Trp390的氨基酸区段，α螺旋15，即含Arg396-Arg400的氨基酸区段，α螺旋16，即含Asn426-Ser430的氨基酸区段，α螺旋17，即含Val431-Asp437的氨基酸区段，α螺旋18，即含Ser440-Asn455的氨基酸区段，α螺旋19，即含Pro456-His460的氨基酸区段，β折叠14，即含His462-Asp469的氨基酸区段，β折叠15，即含Asp471-Ala479的氨基酸区段，β折叠16，即含Gln482-Leu490的氨基酸区段，β折叠17，即含Val495-Cys497的氨基酸区段，β折叠18，即含Arg503-Ile508的氨基酸区段，β折叠19，即含Thr514-Leu516的氨基酸区段，β折叠20，即含Ala520-Glu525的氨基酸区段。

3.根据权利要求1所述的晶体，其特征在于，所述三维结构的第202位天冬氨酸、第266位谷氨酸与第329位天冬氨酸构成催化活性中心。

4.权利要求1～3中任一项所述晶体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：先将预先制备好的高纯度QsGH13蛋白浓缩至5～30mg/ml，接着使用结晶试剂盒作为晶体生长的初筛条件，采用悬滴气相扩散法进行结晶，得到衍射分辨率高的晶体；晶体培养在4～25℃进行，结晶液滴中蛋白溶液与结晶试剂体积比为3：1～1：3，结晶试剂的组成为：0.01～0.2 MTris-HCl，0.1～0.3 M NaCl，质量浓度5～30%的分子量为1000～10000的PEG。