[发明专利]人脐带间充质干细胞的制备方法在审
| 申请号： | 202210076622.7 | 申请日： | 2022-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN114480268A | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 任浩;姜舒;张芸;刘赢滢;谢亮;赵传鑫;李欣;纪惜銮;翁东旭;黄伟;李结明 | 申请（专利权）人： | 深圳市茵冠生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/073 |
| 代理公司： | 深圳市恒程创新知识产权代理有限公司 44542 | 代理人： | 钟永翠 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市光明区凤凰街道塘尾*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脐带 间充质 干细胞 制备 方法 | ||
1.一种人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10、从脐带剥取华通氏胶；
S20、将所述华通氏胶剪碎后，加入生理盐水，混匀、离心，去除上清，得到组织块；
S30、将所述组织块和完全培养基混合，得到组织块液；
S40、将所述组织块液接种至T75培养瓶中，加入完全培养基，培养至细胞融合度为85％，洗涤、消化、终止消化，收集终止消化后的细胞，得到P0代细胞；
S50、将所述P0代细胞接种至T175培养瓶中，加入完全培养基，继续培养，得到人脐带间充质干细胞。
2.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述组织块液中，所述组织块的浓度为1.0g/ml。
3.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，将0.5～1ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。
4.如权利要求3所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，将1.0ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。
5.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，加入完全培养基5～15ml。
6.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S40中，使用胰酶溶液消化，且所述胰酶溶液中，胰酶的浓度为0.625～2.5g/L。
7.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S50中，所述接种的密度为3000～7000个/cm2。
8.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S50中，加入完全培养基16～24ml。
9.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S50之后，还包括：
用胰酶溶液将所述人脐带间充质干细胞进行消化，得到消化后的人脐带间充质干细胞，所述胰酶溶液中，胰酶的浓度为0.625～2.5g/L。
10.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，步骤S30、步骤S40和步骤S50中，完全培养基包括以下组分：
转化生长因子-β1、碱性成纤维细胞生长因子、MEK抑制剂PD0325901、GSK-3抑制剂Laduviglusib、漆黄素、ALK-5抑制剂A 83-01、荜茇酰胺、达沙替尼、BCL-XL抑制剂A1331852、白细胞介素-1、白细胞介素-6、碳酸氢钠、CuSO4、ZnSO4、Na2SeO3、FeCl3、Na2SiO3、MnSO4、NH4VO3、NiSO4、SnCl2、AlCl3、AgNO3、Ba(C2H3O2)2、KBr、CdCl2、CoCl2、CrCl3、NaF以及GeO2。
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