[发明专利]人脐带间充质干细胞的制备方法在审
申请号: | 202210076622.7 | 申请日: | 2022-01-21 |
公开(公告)号: | CN114480268A | 公开(公告)日: | 2022-05-13 |
发明(设计)人: | 任浩;姜舒;张芸;刘赢滢;谢亮;赵传鑫;李欣;纪惜銮;翁东旭;黄伟;李结明 | 申请(专利权)人: | 深圳市茵冠生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775;C12N5/073 |
代理公司: | 深圳市恒程创新知识产权代理有限公司 44542 | 代理人: | 钟永翠 |
地址: | 518000 广东省深圳市光明区凤凰街道塘尾*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 脐带 间充质 干细胞 制备 方法 | ||
本发明公开一种人脐带间充质干细胞的制备方法,包括以下步骤:S10、从脐带剥取华通氏胶;S20、将所述华通氏胶剪碎后,加入生理盐水,混匀、离心,去除上清,得到组织块;S30、将所述组织块和完全培养基混合,得到组织块液;S40、将所述组织块液接种至T75培养瓶中,加入完全培养基,培养至细胞融合度为85%,洗涤、消化、终止消化,收集终止消化后的细胞,得到P0代细胞;S50、将所述P0代细胞接种至T175培养瓶中,加入完全培养基,继续培养,得到人脐带间充质干细胞。本方法首先自脐带剥取华通氏胶,剪碎离心得到组织块,加完全培养基配成组织块液,然后将组织块液原代培养至细胞融合度为85%,收获P0代细胞,最后将P0代细胞传代培养得到人脐带间充质干细胞。
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域,特别涉及一种人脐带间充质干细胞的制备方法。
背景技术
人脐带间充质干细胞具有较高的分化潜能,可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、神经、肝和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。为便于应用,需要对人脐带间充质干细胞进行体外制备培养。因此,需要一种有效的方法来制备得到人脐带间充质干细胞。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种人脐带间充质干细胞的制备方法,旨在通过所述人脐带间充质干细胞的制备方法制备得到人脐带间充质干细胞。
为实现上述目的,本发明提出一种人脐带间充质干细胞的制备方法,包括以下步骤:
S10、从脐带剥取华通氏胶;
S20、将所述华通氏胶剪碎后,加入生理盐水,混匀、离心,去除上清,得到组织块;
S30、将所述组织块和完全培养基混合,得到组织块液;
S40、将所述组织块液接种至T75培养瓶中,加入完全培养基,培养至细胞融合度为85%,洗涤、消化、终止消化,收集终止消化后的细胞,得到P0代细胞;
S50、将所述P0代细胞接种至T175培养瓶中,加入完全培养基,继续培养,得到人脐带间充质干细胞。
可选地,所述组织块液中,所述组织块的浓度为1.0g/ml。
可选地,步骤S40中,将0.5~1.0ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。
可选地,步骤S40中,将1.0ml所述组织块液接种至T75培养瓶中。
可选地,步骤S40中,加入完全培养基5~15ml。
可选地,步骤S40中,使用胰酶溶液消化,且所述胰酶溶液中,胰酶的浓度为0.625~2.5g/L。
可选地,步骤S50中,所述接种的密度为3000~7000个/cm2。
可选地,步骤S50中,加入完全培养基16~24ml。
可选地,步骤S50之后,还包括:
用胰酶溶液将所述人脐带间充质干细胞进行消化,得到消化后的人脐带间充质干细胞,所述胰酶溶液中,胰酶的浓度为0.625~2.5g/L。
可选地,步骤S30、步骤S40和步骤S50中,完全培养基包括以下组分:
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