[发明专利]一种快速检测三疣梭子蟹资源量动态变化的方法

说明书

本发明公开了一种快速检测三疣梭子蟹资源量动态变化的方法，属于三疣梭子蟹资源量分析技术领域。本发明的方法是采用被检测海域的柱状沉积物样品，提取柱状沉积物样品中的DNA，并以不同深度柱状沉积物样品的DNA为模板，采用三疣梭子蟹COI基因的荧光定量引物对，进行荧光定量PCR扩增；根据扩增曲线获得不同样品DNA扩增后的Ct值；然后对照三疣梭子蟹COI基因拷贝数与Ct值的标准曲线，获得不同深度柱状沉积物样品DNA中COI基因的拷贝数；最后根据测得的不同深度柱状沉积物样品的同位素年代，获得疣梭子蟹资源量动态变化结果。该方法真实可信，具有较高的检出率，为分析影响三疣梭子蟹资源量动态变化的因素奠定基础。

技术领域

本发明属于三疣梭子蟹资源量分析技术领域，具体涉及一种快速检测三疣梭子蟹资源量动态变化的方法。

背景技术

近年来，随着人类活动，特别是过度捕捞和环境污染对海洋渔业资源干扰越来越频繁，三疣梭子蟹资源已大幅衰退，为恢复三疣梭子蟹资源量，多地开始实施大规模资源放流工作，取得了良好的经济效益、社会效益，随着投入资金和放流数量的不断增加，三疣梭子蟹产量并未线性增加，并且存在年间波动剧烈、生长缓慢等现象。同时，由于统计产量不准、资源评估方法单一等问题，导致科学准确的进行三疣梭子蟹资源量的评价体系一直未能建立。因此，现阶段亟需一种能够准确检测三疣梭子蟹种群结构的分析方法及资源量动态变化的方法，该方法能够准确地检测三疣梭子蟹的含量，而不受其他物种的干扰，并且检测的结果不受到人为主观因素的影响。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种快速检测三疣梭子蟹资源量动态变化的方法。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速检测三疣梭子蟹资源量动态变化的方法，步骤如下：

(1)采集被检测海域的柱状沉积物样品，柱状沉积物采集时，以1-2cm为一个采集深度，采集若干个不同深度的柱状沉积物，记为A1、A2、A3、A4…An；样品采集后低温保存；

(2)提取采集的不同深度柱状沉积物样品中的DNA；

(3)以不同深度柱状沉积物样品的DNA为模板，采用三疣梭子蟹COI基因的荧光定量引物对，进行荧光定量PCR扩增；根据扩增曲线获得不同样品DNA扩增后的Ct值；

(4)将获得的不同样品DNA扩增后的Ct值对照三疣梭子蟹COI基因拷贝数与Ct值的标准曲线，获得不同深度柱状沉积物样品DNA中COI基因的拷贝数；

(5)测定柱状沉积物A1、A2、A3、A4…An的同位素年代，并根据年代绘制不同深度柱状沉积物样品DNA中COI基因的拷贝数与年代的关系图，即得三疣梭子蟹资源量动态变化结果。

在一个具体的实施例中，所述步骤(4)中三疣梭子蟹COI基因拷贝数与Ct值的标准曲线由以下方法获得：

提取三疣梭子蟹基因组DNA作为模板，利用三疣梭子蟹COI基因的引物对进行扩增，检测扩增产物中COI基因的浓度并计算COI基因的拷贝数；根据扩增产物中COI基因的拷贝数将扩增产物稀释成不同拷贝数梯度的溶液作为模板，采用三疣梭子蟹COI基因的荧光定量引物对，进行荧光定量PCR扩增；根据扩增曲线获得不同拷贝数梯度的溶液扩增后的Ct值，以Ct值为横坐标，用已知起始拷贝数的对数为纵坐标，绘制三疣梭子蟹COI基因的标准曲线。

在一个具体的实施例中，所述三疣梭子蟹COI基因的引物对如下：

正向序列COI for为：5’-TCGTGCTGAATTAGGACAACC-3’；

反向序列COI rev为：5’-AAGGAGAGAATATAACAGGCCGAC-3’。