[发明专利]抗真菌脂肽及链霉菌在抗真菌脂肽制备中的应用

说明书

本发明公开了抗真菌脂肽及链霉菌在抗真菌脂肽制备中的应用，本方案巧妙性通过链霉菌的代谢物进行提取脂肽A和脂肽B，且结合本方案的制备方法，可制得纯度高于95％的脂肽A和脂肽B的单体，这对于后续解析其拮抗病原真菌的机制及植株生防效果的试验都有重要的帮助；同时，脂肽A和脂肽B拮抗机制的差异，也能为后续脂肽A和脂肽B的生物合成研究指出方向。

技术领域

本发明涉及生物技术领域领域，尤其涉及抗真菌脂肽及链霉菌在抗真菌脂 肽制备中的应用。

背景技术

脂肽类物质是由微生物代谢产生的一类具有很强表面活性剂，是由多个氨 基酸构成的多肽环和一条疏水脂肪酸侧链组成的两亲性分子。脂肽类物质包括 表面活性素、丰原素、伊枯草菌素、罗克霉素和脂肽A等。已经报道发现脂 肽类物质具有抗细菌、抗真菌、抗肿瘤和抗病毒等多种生物学活性。脂肽类物 质的合成是由非核糖体肽合成酶(Nonribosomal peptide synthetases)和聚酮合 酶(Polyketide synthases)共同编码合成，这些基因一般是成簇存在的，所以 这一类物质大多是以同系物的形式同时存在，分离纯化这些结构类似物非常困 难，因此当前的研究大多是脂肽复合物的抑制活性，但这些物质结构上的轻微 变化，可能引起活性上的巨大差异，因此开发一种制备脂肽单体的方法尤为重 要。

发明人在实验室中分离出一株链霉菌(Streptomyces sp.XY006)，经研 究，该链霉菌的主要次级代谢产物是脂肽A(Lipopeptin A)和与脂肽A相差 一个亚甲基的脂肽B(Lipopeptin B)(暂定名称)，前期试验发现，脂肽A和 B结构上虽仅相差一个亚甲基，但其活性差异显著。且经过试验论证，脂肽A 和脂肽B的混合初提物对多种重要的农业病原真菌均有明显的抑制作用，而 相应的研究报道目前暂未见有披露。在此基础上，申请人为进一步研究其拮抗 机制，通过一系列的分离纯化方法制备得到脂肽A和B的活性单体。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种实施可靠、制备过程高效、便利和 可控的抗真菌脂肽及链霉菌在抗真菌脂肽制备中的应用。

为了实现上述的技术目的，本发明所采用的技术方案为：

一种抗真菌脂肽，其化学式为C₅₃H₈₂N₁₀O₁₉，其结构式如下：

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基于上述，本发明还提供链霉菌在抗真菌脂肽制备中的应用，其包括将链 霉菌及其培养基进行冷冻处理后，再对其进行解冻和加压过滤处理以获得菌 液，所得菌液经浓缩和醇提取后，获得粗提物，该粗提物经复溶、正丁醇等体 积萃取多次后，收集有机相进行浓缩，再将浓缩物调整至预设浓度后，通过固 相萃取柱，然后经多级梯度洗脱处理，再收集洗脱物，对其进行分离纯化后， 制得抗真菌脂肽，所述抗真菌脂肽包括脂肽A和脂肽B，其中，所述脂肽A 的化学式为C₅₄H₈₄N₁₀O₁₉，其结构式为：

所述脂肽B的化学式为C₅₃H₈₂N₁₀O₁₉，其结构式为：

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作为一种可能的实施方式，进一步，所述链霉菌为链霉菌XY006，其被 命名为链霉菌Streptomyces sp.，已于2021年12月13日保藏于中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院 3号，保藏编号为CGMCC No.24090。

作为一种较优的实施选择，优选的，所述应用具体包括如下步骤：