[发明专利]一种水产养殖用复合微生物制剂的制备方法

说明书

本发明公开了一种水产养殖用复合微生物制剂的制备方法，制备所述复合微生物制剂原料包括光合细菌、酿酒酵母菌、枯草芽孢杆菌、蛭弧菌、复合EM菌和碳源。本发明对植物纤维通过碱溶液进行浸泡预处理，能够提高纤维素作为碳源的处理分解效果，且采用常见且纤维素含量高的农作物作为碳源，能够有效降低成本，另外通过采用物理除氧厌氧培养法获得紫色非硫光合细菌富集培养液后，再对紫色非硫光合细菌进行分离纯化，能够得到效果更佳的紫色非硫光合细菌，在制成复合微生物制剂后，其与其它菌粉的协同作用更强，为水体的净化治理与水产品的健康生长提供了良好的作用效果。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，特别是涉及一种水产养殖用复合微生物制剂的制备方法。

背景技术

复合微生物制剂，亦称“复合微生态制剂”，是一类用于增强水产养殖生物生长与免疫能力等的微生物制剂，由两种或多种微生物按适当比例共同培养，充分发挥群体优势，取得最佳应用效果。所用微生物通常有光合菌群、放线菌群、酵母菌群和乳酸菌群等多种有效微生物群。复合微生物制剂可分解养殖水体中的有机物，使氨氮、亚硝基氮等转化为无害物质，对水体净化、建立良好生态平衡环境有重要作用；菌群在新陈代谢过程中可产生多种维生素、氨基酸与生理活性物质，从而促进动植物的营养吸收、生长和提高免疫与抗病能力，增强养殖效果。

在培育各个菌株时，通常采用葡萄糖、甲醇或者蔗糖来作为碳源以供菌株的培育，导致其成本过高，且现有的复合微生物制剂通常采用的光合细菌为普通光合细菌，在与其它微生物协同作用处理水质时，其效果有所欠缺，存在一定限制性，为此我们提出了一种水产养殖用复合微生物制剂的制备方法解决上述问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种水产养殖用复合微生物制剂的制备方法，避免了在培育各个菌株时，采用的碳源成本过高而导致其制备成本增加，并且提升了微生物在处理水质时的协同作用性。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种水产养殖用复合微生物制剂的制备方法，制备所述复合微生物制剂原料包括紫色非硫光合细菌、酿酒酵母菌、枯草芽孢杆菌、蛭弧菌、复合EM菌和碳源，包括以下步骤：

步骤一、制作碳源培养基：向农作物植物纤维中添加碱溶液进行浸泡预处理，向预处理之后的纤维素中添加纤维素分解菌，得到碳源混合液，并制成培养基；

步骤二、筛选纯化紫色非硫光合细菌：采用物理除氧厌氧培养法获得紫色非硫光合细菌富集培养液后，再对紫色非硫光合细菌进行分离纯化；

步骤三、菌种的液体发酵：将各菌种在其适宜的培养条件下活化培养，再分别将其接种到步骤一制成的培养基中扩大培养至对数生长期；

步骤四、菌株液混合：调节OD₆₀₀＝1.5，然后将各菌株培养液混合，备用；

步骤五、菌种的真空冷冻干燥：将步骤四的混合菌液进行离心处理，移去上清液后再加入冻干保护剂，之后在-76℃的环境下预冻1-5h，再将冻结样品移入真空冷冻干燥机中冷冻干燥，制成菌粉；

步骤六、菌粉包装：采用水溶性材料将菌粉进行包裹，并在包装后贮存在阴凉、干燥、通风、清洁的仓库中，即可。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤一中，所述植物纤维采用芦苇纤维、秸秆纤维和玉米芯纤维中的一种或多种。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤一中，所述碱溶液为质量分数1-5％的NaOH溶液。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤二中，试管中的单菌落采用双层平板法进行纯化，且保存已经纯化的菌株。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤四中，若OD₆₀₀1.5，用培养液稀释至0D₆₀₀＝1.5；若OD₆₀₀1.5，离心后移去部分上清液，再调整至0D₆₀₀＝1.5。