[发明专利]一种易栓症基因突变的多重PCR检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是，所述方法包括以下步骤：

步骤一、获取待检测基因第一轮扩增产物；

步骤二、使用接头引物对步骤一获得的扩增产物进行第二轮扩增，其中，所述接头引物的上游引物SEQ ID NO.3的碱基序列为：

“AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACGAGCTCAAACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT”；

下游引物SEQ ID NO.4的碱基序列为：

“CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGATGCGAGTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCA”；

步骤三、对步骤二获得的文库进行测序；

步骤四、对步骤三获得的测序结果进行分析，实现全编码区的突变检测。

2.如权利要求1所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：步骤一包括使用609对引物对所述待检测基因进行扩增，所述609对引物为具有SEQ ID No 5-SEQ ID No1327所示序列或其同源序列。

3.如权利要求2所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：所述609对引物包括第一套引物对与第二套引物对；

所述第一套引物对为具有SEQ ID N0.5-SEQ ID NO.719所示序列或其同源序列；

所述第二套引物对为具有SEQ ID N0.720-SEQ ID NO.1327所示序列或其同源序列。

4.如权利要求3所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：序列SEQ IDN0.5-SEQ ID NO.1327相邻序列号的引物两两配对形成609对引物。

5.如权利要求3所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：每个上游引物的5'端添加序列SEQ ID N0.1：

“ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT”；

每个下游引物的5'端添加序列SEQ ID N0.2：

“GTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCA”。

6.如权利要求1所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：所述步骤二包括对所述步骤一获得的产物进行纯化回收，对纯化回收后的扩增产物进行第二轮扩增。

7.如权利要求3所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：所述方法检测基因包括：SERPINC1、PROS1、PROC、F2、F5、F8、F9、F12、PLG、THBD、PROCR、ADAMTS13、TFPI、SERPIND1、MTHFR，FGA、FGB、FGG、PLAT、SERPINE1。

8.一种易栓症基因突变的多重PCR检测盒，其特征是，所述检测盒包括引物SEQ IDNO.3，碱基序列为：

“AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACGAGCTCAAACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT'；

引物SEQ ID NO.4，碱基序列为：

“CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGATGCGAGTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCA”。

9.如权利要求8所述的一种易栓症基因突变的多重PCR检测盒，其特征是：所述检测盒还包括609对引物，所述609对引物为具有SEQ ID No 5-SEQ ID No 1327所示序列或其同源序列。

10.如权利要求9所述的一种易栓症基因突变的多重PCR检测盒，其特征是：所述609对引物包括第一套引物对与第二套引物对；

所述第一套引物对为具有SEQ ID N0.5-SEQ ID NO.719所示序列或其同源序列；

所述第二套引物对为具有SEQ ID N0.720-SEQ ID NO.1327所示序列或其同源序列。

所述第一套引物对的反应体系按照如下比例配置：第一引物8-11份，第一扩增预混合溶液10-15份，基因模板2-5份，水3-6份。

所述第二套引物对的反应体系按如下比例配置：第二引物1-5份，第二扩增预混合溶液5-9份，第一轮引物回收产物3-6份，水3-6份。