[发明专利]DPH6基因在制备具有毒素抗性细胞系中的应用有效
| 申请号： | 202210085844.5 | 申请日： | 2022-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN114410680B | 公开（公告）日： | 2023-03-31 |
| 发明（设计）人： | 梅峰 | 申请（专利权）人： | 乾元康安（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/55;C12N9/22;C12N15/113;C12N15/31;C12N5/10;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京预立生科知识产权代理有限公司 11736 | 代理人： | 朱萍 |
| 地址： | 215421 江苏省苏州市太*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | dph6 基因 制备 具有 毒素 抗性 细胞系 中的 应用 | ||
1.一种制备具有毒素抗性细胞系或提高细胞系的毒素耐受性的方法，其特征在于，所述方法包括利用CRISPR/Cas9系统抑制DPH6基因表达；所述CRISPR/Cas9系统中使用的靶向DPH6的gRNA序列选自以下组：
1）SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；
2）SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；
3）SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；
4）SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10；
5）SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毒素是ADP-核糖基化毒素。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述毒素是DTA或PE。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞系是哺乳动物细胞。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞系是正常的非癌细胞。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞是HEK293或CHO细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于， HEK293是freestyle 293F。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括将编码Cas9蛋白的核酸序列以及编码靶向DPH6的gRNA的核酸序列导入所选细胞中。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括将包含编码Cas9蛋白的核酸序列的第一表达载体以及包含编码靶向DPH6的gRNA的核酸序列的第二表达载体导入所选细胞中。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括将同时包含编码Cas9蛋白的核酸序列和编码靶向DPH6的gRNA的核酸序列的表达载体导入所选细胞中。
11.一种生产毒素的方法，其特征在于，所述生产毒素的方法包括将表达毒素的核酸分子导入利用权利要求1-10中任一项所述的方法制备的具有毒素抗性的细胞系中。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述毒素是蛋白质毒素。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述毒素是DTA或PE。
14.一种生产毒素偶联蛋白的方法，所述生产毒素偶联蛋白的方法包括将表达毒素偶联蛋白的核酸分子导入利用权利要求1-10中任一项所述的方法制备的具有毒素抗性的细胞系中。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述毒素偶联蛋白包括抗体偶联药物、毒素融合蛋白。
16.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述毒素是蛋白质毒素。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述毒素是DTA或PE。
18.一种gRNA，所述gRNA的序列选自以下组：
1）SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；
2）SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；
3）SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；
4）SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10；
5）SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。
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