[发明专利]一种提高根瘤菌固氮效率的人工串联多肽ADPs、表达载体和重组根瘤菌构建及应用

权利要求书

1.一种提高根瘤菌固氮效率的人工串联多肽ADPs，所述人工串联多肽ADPs包括若干个依次连接的NCR多肽；

所述NCR多肽的等电点为4.23～8.25。

2.根据权利要求1所述人工串联多肽ADPs，其特征在于，所述人工串联多肽ADPs包括由3～4个NCR多肽依次利用linker连接后形成的多肽。

3.根据权利要求1或2所述人工串联多肽ADPs，其特征在于，所述人工串联多肽ADPs的结构包括：第一NCR-linker-第二NCR-linker-第三NCR-linker-第四NCR；

所述第一NCR的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二NCR的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述第三NCR的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述第四NCR的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求3所述人工串联多肽ADPs，其特征在于，所述第一NCR的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述第二NCR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述第三NCR的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述第四NCR的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

5.一种包含权利要求1～4任一项所述人工串联多肽ADPs的编码基因的表达载体，所述表达载体的基础载体包括pHC60。

6.根据权利要求5所述表达载体，其特征在于，将所述编码基因插入所述基础载体的XhoI和XbaI酶切位点之间。

7.一种表达权利要求1～4任一项所述人工串联多肽ADPs的重组根瘤菌，所述重组根瘤菌的基因组中包含权利要求1～4任一项所述人工串联多肽ADPs的编码基因。

8.权利要求7所述重组根瘤菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1～3任一项所述人工串联多肽ADPs的编码基因插入pHC60的XhoI和XbaI酶切位点之间，得表达载体；

将所述表达载体转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆后提取重组质粒；

将所述重组质粒转化Mesorhizobium japonicum MAFF303099，筛选阳性菌落，得所述重组根瘤菌。

9.权利要求1～4任一项所述人工串联多肽ADPs或权利要求5或6任一项所述表达载体或权利要求7所述重组根瘤菌在提高固氮效率中的应用。

10.权利要求1～4任一项所述人工串联多肽ADPs或权利要求5或6任一项所述表达载体在调控根瘤类菌体形态中的应用。