[发明专利]一种通过A2B5+胶质瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗

说明书

本发明提供了一种通过A2B5+脑胶质瘤干细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗。具体地，本发明还提供了靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞、细胞毒性T淋巴细胞、细胞制剂及其制备方法与应用。本发明的树突状细胞疫苗可用于针对肿瘤的预防和主动免疫治疗，安全性好，且具有高纯度、高效杀伤能力和强特异性，可增强患者的免疫能力，改善预后，一定程度上防止肿瘤复发。

技术领域

本发明涉及生物技术及医药领域，具体地，本发明涉及一种通过A2B5+脑胶质瘤干细胞样抗原致敏的树突状细胞疫苗及其制备方法与应用。

背景技术

树突状细胞(Dendritic cells,DC)是人体内功能最强的专职抗原提呈细胞，它能激活CD8+细胞毒性T细胞(CTL)和CD4+辅助性T细胞(Th)，在抗肿瘤、抗病毒等免疫应答过程中发挥重要作用。大多数研究表明体内肿瘤抑制了DC的成熟而非直接抑制DC的功能。研究发现，恶性肿瘤组织内树突状细胞的数量、功能与肿瘤组织原发灶、转移灶中瘤细胞向周围组织浸润的程度以及患者的临床分期呈负相关，而大部分实体肿瘤内浸润树突状细胞的数量越多则患者的预后越好(J Surg Oncol,2007,95(2):123-128)。肿瘤患者体内的树突状细胞存在分化成熟障碍，导致其在表达细胞因子、表面抗原、激活T细胞增殖并诱导CTL生成等方面均存在不同程度的功能缺陷，包括CD8+T细胞增加、CD4+T细胞降低、CD4+/CD8+比例降低以及自然杀伤细胞数量下降等。所以体外诱导功能性DC用于免疫治疗有着重要的临床应用价值。

DC广泛分布与人体多个部位，如血液以及肝脾、淋巴结、肺、肾、胃肠道等组织间质，约占外周血单个核细胞总数0.5-1％。DC亚群分类复杂，骨髓源DC(mDC)和淋巴源DC(pDC)是外周血DC的两种主要类型。DC可以经由单核细胞分化生成，分离PBMC中的单核细胞体外培养，GM-CSF和IL-4诱导生成未成熟DC(Curr Protoc Immunol 2005；Chapter 22:Unit22F 4)。未成熟DC可以通过不同的成熟诱导成分分化成熟，DC的成熟状态是决定DC疫苗有效性的一个关键因素。未成熟DC致敏T细胞能力有限，并且还可能诱导T细胞耐受。另外成熟DC的迁移能力更强，能更有效的迁移至次级淋巴组织的T细胞区，进而诱发免疫反应。

脑胶质瘤是一种最常见的颅内肿瘤，发病率约占全部颅内肿瘤的40％-50％，其中脑胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)是最常见并且恶性程度最高的胶质瘤，5年存活率仅仅为5.1％，现在GBM最有效的治疗方案是手术、放疗和化疗为主的综合治疗，化疗药物替莫唑胺与放疗联合应用也仅比单纯放疗的中位生存期提高了3个月，并且经过积极治疗后中位生存期仍小于15个月。

肿瘤干细胞(Cancer Stem Cells，CSCs)是具有干细胞(Stem cells)性质的癌细胞，有“自我复制”(Self-renewal)以及“具有多细胞分化”(Differentiation)等能力，每一个肿瘤细胞具有独特的细胞表面标志可以被识别出。在肿瘤的存活、增殖、转移和复发等方面，肿瘤干细胞起着至关重要的作用。A2B5+脑胶质瘤细胞具备有肿瘤干细胞的特性，所以若能有效杀伤A2B5+脑胶质瘤细胞，可以有效地治疗脑胶质母细胞瘤，以及防止其复发。

因此发明一种可以高效杀伤A2B5+脑胶质瘤细胞的治疗方案，在临床上具有重大意义，是脑胶质瘤母细胞癌患者的福音。

发明内容

本发明的一个目的就是提供一种有效的A2B5阳性肿瘤的预防性和/或治疗性疫苗。

本发明的另一目的在于提供一种靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞、细胞毒性T淋巴细胞、细胞制剂以及它们的制备方法与应用。

在本发明的第一方面，提供了一种靶向A2B5阳性肿瘤的树突状细胞的制备方法，包括步骤：

(a)制备A2B5阳性肿瘤干细胞抗原；和