[发明专利]一种次磺酸化蛋白质特异性标记分子及其制备方法与应用

权利要求书

1.式Ⅰ所示化合物，

2.权利要求1所述的化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)溴乙酸-叔丁酯与2,6-二甲基-哌啶在三氟乙酸中经取代反应，得到(2,6-二甲基-哌啶-1-基)-乙酸-叔丁酯；(2,6-二甲基-哌啶-1-基)-乙酸-叔丁酯在酸性条件下脱保护得到(2,6-二甲基-哌啶-1-基)-乙酸盐酸盐；

(2)将所述(2,6-二甲基-哌啶-1-基)-乙酸盐酸盐和碳二亚胺类缩合剂加入至有机溶剂中，冰浴搅拌，然后再依次加入催化剂和双环[6,1,0]壬炔，搅拌后再加入缚酸剂，经酰胺反应，得到式Ⅰ所示化合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述溴乙酸-叔丁酯和所述2,6-二甲基-哌啶的投料摩尔比为1:2～1:4；

所述2,6-二甲基-哌啶和所述三氟乙酸的体积比为1：5；

所述取代反应的温度为回流温度，时间为5～8h；

步骤(2)中，所述(2,6-二甲基-哌啶-1-基)-乙酸盐酸盐、所述碳二亚胺类缩合剂和所述催化剂的投料摩尔比为1:10:10；

所述碳二亚胺类缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI)中的一种或多种；

所述催化剂为羟基苯并三氮唑、4-N,N-二甲基吡啶、N-羟基琥珀酰亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺中的一种或多种；

所述缚酸剂的体积为反应体系总体积的5％；

所述缚酸剂为三乙胺；

所述有机溶剂为二氯甲烷；

所述酰胺反应的温度为15～30℃，时间为6～24h。

4.权利要求1所述的化合物在下述A1-A2中至少一种中的应用：

A1、标记次磺酸化蛋白质；

A2、制备用于标记次磺酸化蛋白质的产品。

5.权利要求1所述的化合物和抗标签固定化抗体树脂在下述B1-B4中至少一种中的应用，所述抗标签固定化抗体树脂能够特异性识别式Ⅰ所示化合物中的二甲基哌啶基团；

B1、特异性富集次磺酸化蛋白质；

B2、制备用于特异性富集次磺酸化蛋白质的产品；

B3、鉴定次磺酸化蛋白质；

B4、制备用于鉴定次磺酸化蛋白质的产品。

6.一种用于特异性富集次磺酸化蛋白质或鉴定次磺酸化蛋白质的试剂盒，包括权利要求1所述的化合物和抗标签固定化抗体树脂；所述抗标签固定化抗体树脂能够特异性识别式Ⅰ所示化合物中的二甲基哌啶基团。

7.用权利要求1所述的化合物和抗标签固定化抗体树脂鉴定生物样本中次磺酸化蛋白质的方法，其中，所述抗标签固定化抗体树脂能够特异性识别式Ⅰ所示化合物中的二甲基哌啶基团，包括如下步骤：

(1)用式Ⅰ所示化合物标记生物样本中的次磺酸化蛋白质，酶切，收集肽段；

(2)用抗标签固定化抗体特异性吸附所述肽段中标记有式Ⅰ所示化合物的肽段以富集次磺酸化肽段，然后洗脱出标记有式Ⅰ所示化合物的肽段；

(3)对所述标记有式Ⅰ所示化合物的肽段进行液相色谱-质谱分析，实现所述次磺酸化蛋白质的鉴定。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述洗脱在酸性或中性条件下进行；洗脱试剂优选为由体积分数为0.4％的三氟乙酸、体积分数为50％的乙腈和水组成的混合液。