[发明专利]一种利用氘带内标物检测食品中爱德万甜的方法

权利要求书

1.一种利用氘带内标物检测食品中爱德万甜的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制标准溶液

①爱德万甜标准储备液：称取爱德万甜标准物质于容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得到1mg/mL的标准储备液；4℃下避光保存，所述的爱德万甜作为外标物；

②爱德万甜标准中间溶液：将爱德万甜标准储备液置于容量瓶中，用甲醇稀释到刻度配制成浓度为10μg/mL的标准中间溶液(1)，4℃下避光保存；另外将爱德万甜标准储备液置于容量瓶中，用甲醇稀释到刻度配制成浓度为1μg/mL的标准中间溶液(2)，4℃下避光保存；

③爱德万甜-D3标准储备溶液：将爱德万甜-D3标准物质用甲醇溶解，得到1mg/mL的标准储备液；4℃下避光保存，所述的爱德万甜-D3作为氘带内标物；

④爱德万甜-D3标准中间溶液：将爱德万甜-D3标准储备液置于容量瓶中，用甲醇稀释到刻度配制成浓度为10μg/mL的标准中间溶液，4℃下避光保存；

⑤标准工作溶液:分别移取爱德万甜标准中间溶液(2)10μL、100μL、500μL、1mL、2mL、5mL，和爱德万甜-D3标准中间溶液10μL，置于容量瓶中采用乙腈定容，分别得浓度为1.0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL爱德万甜系列标准工作溶液，每个标准工作溶液还有爱德万甜-D3 10ng/mL；

(2)样品的前处理方法

准确称取样品2g，置于50mL具塞离心管中，加入200μL浓度为10μg/mL的爱德万甜-D3标准中间溶液，加入3mL水，涡旋振荡30s，加入2g NaCl后，加入20mL乙腈，以12000r/min离心3min，取2mL乙腈层于离心管中，加入50mg C₁₈，涡旋1min，以12000r/min离心5min，取上清液，过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析；

(3)确定液相色谱-串联质谱分析参考条件

(5)定性判定

5.1)按照高效液相色谱-串联质谱条件测定步骤(1)⑤得到的爱德万甜系列标准工作溶液,得到系列标准溶液中爱德万甜的色谱保留时间及定量离子对和定性离子对色谱峰，以定量离子对丰度的百分比作为定性离子对的相对丰度，记录标准工作溶液中爱德万甜的相对离子丰度；

5.2)再按照高效液相色谱-串联质谱条件测定样品，得到样品中爱德万甜相应的色谱峰；其中，测定样品过程中高效液相色谱-串联质谱条件与5.1)相同；

样品中应呈现爱德万甜定量离子对和定性离子对的色谱峰，色谱峰保留时间与标准溶液中爱德万甜色谱峰保留时间一致，变化范围在±2.5％之内；并且相对离子丰度与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表3规定范围，则可以判定样品中存在爱德万甜；

表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对丰度(％)	最大允许偏差(％)
k＞50％	±20
50％≥k＞20％	±25
20％≥k＞10％	±30
k≤10％	±50

(6)定量测定

测定步骤(1)⑤得到的爱德万甜系列标准工作溶液中爱德万甜和爱德万甜-D3的含量及相应的色谱峰面积，以爱德万甜和爱德万甜-D3浓度比为横坐标，以爱德万甜和爱德万甜-D3峰面积比为纵坐标，得内标法标准曲线；样品溶液中爱德万甜的含量，从内标法标准曲线中确定；

样品中爱德万甜含量，按公式(1)进行计算；

式中：X表示样品中爱德万甜的含量，单位为μg/kg；C表示从内标法标准曲线中读出的样品溶液中爱德万甜的浓度，ng/mL；V表示样品提取液体积，mL；m表示样品的质量，g；

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。

2.根据权利要求1所述的一种利用氘带内标物检测食品中爱德万甜的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，液相色谱-串联质谱分析参考条件如下：

①色谱参考条件

a)色谱柱：C₁₈柱，4.6mm×50mm，2.7μm；

b)流动相：A：水，B：乙腈，梯度洗脱；

c)流速：0.35mL/min；

d)柱温：30℃；

e)进样量：2μL；

梯度洗脱程序见表1；

表1

②质谱参考条件

离子源：电喷雾离子源ESI；

检测方式：多反应监测MRM；

扫描方式：正离子模式；

离子化电压IS：5500V；

雾化气Gas1：50psi；

辅助气Gas2：50psi；

气帘气压力CUR：35psi；

雾化温度TEM：500℃。