[发明专利]一种适用于帕金森疾病基因治疗的慢病毒载体

权利要求书

1.一种慢病毒载体系统，其特征在于，所述载体系统为非整合型慢病毒载体系统，其包装质粒包括表达包膜蛋白的pMD.2G、表达REV蛋白的pRSV-REV、整合酶突变失活的pMDlg/pRRE-IN mut和表达TH、AADC和CH1的载体质粒；

或所述载体系统为整合型慢病毒载体系统，其包括表达包膜蛋白的pMD.2G、表达REV蛋白的pRSV-REV、pMDlg/pRRE和表达TH、AADC和CH1的载体质粒。

2.根据权利要求1所述的慢病毒载体系统，其特征在于，所述表达TH、AADC和CH1的载体质粒是通过包括如下步骤的方法构建而得：

S1、设计需要合成的基因：TH和CH1通过多肽GS基因连接再通过P2A基因与AADC基因连接；

S2、合成基因：根据设计，在TH、AADC和CH1基因的5’端加入Kozak序列，合成基因；

S3、构建载体质粒：将合成的基因片段连接入限制性内切酶BamHI/XhoI酶切后的载体，即得。

3.根据权利要求2所述的慢病毒载体系统，其特征在于，步骤S1中还包括对设计好的基因进行适合在哺乳动物真核细胞表达的密码子优化的步骤。

4.根据权利要求2所述的慢病毒载体系统，其特征在于，步骤S3中，所述载体为载体pCCL-PGK-eGFP。

5.根据权利要求1所述的慢病毒载体系统，其特征在于，所述表达TH、AADC和CH1基因的载体质粒为pCCL-PGK-TH-GS15-CH1-P2A-AADC，载体序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求1所述的慢病毒载体系统，其特征在于，整合酶突变失活的pMDlg/pRRE-IN mut，包括整合酶具有D64V的pMDlg/pRRE-D64V。

7.根据权利要求6所述的慢病毒载体系统，其特征在于，pMDlg/pRRE-D64V表达的失活整合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

8.一种根据权利要求1-7中任一项所述的慢病毒载体系统的制备方法，其特征在于，将所述质粒pMD.2G,pRSV-REV,整合酶突变失活的pMDlg/pRRE-IN mut或pMDlg/pRRE，和载体质粒共转染进宿主细胞，浓缩、纯化，得到能表达TH、AADC和CH1蛋白的慢病毒系统。

9.一种根据权利要求1-7中任一项所述的慢病毒载体系统在制备治疗帕金森疾病的制剂中的用途。