[发明专利]一种适用于帕金森疾病基因治疗的慢病毒载体

说明书

本发明公开了一种适用于帕金森疾病基因治疗的慢病毒载体；其包装质粒包括表达包膜蛋白的pMD.2G，表达REV蛋白的pRSV‑REV，整合酶突变失活的pMDlg/pRRE‑IN mut或pMDlg/pRRE，和表达TH、AADC和CH1的载体质粒。本发明提供了2种慢病毒载体递送外源基因，一种是具有基因整合作用的慢病毒载体，另一种是非整合型慢病毒载体；都将目的基因递送到细胞中长期表达蛋白；整合型慢病毒载体将所递送的外源基因整合至基因组中，在细胞扩增后依然可以稳定表达蛋白；非整合型慢病毒载体将所递送的外源基因游离于基因组外，不干扰宿主基因组，在终末分化的细胞内可以长期存在，并表达蛋白。

技术领域

本发明属于医疗技术领域，涉及一种慢病毒载体，尤其涉及一种适用于帕金森疾病基因治疗的慢病毒载体。

背景技术

帕金森疾病是一种神经退行性疾病，患者表现出多种症状，有静止性震颤、行动缓慢和肌强直。60岁以上的人群中患病率有1％，世界总患病人数达到7,000,000-100,000,000。虽然帕金森疾病的具体病因尚不完全明确，但是病理是比较明确的。帕金森疾病是由黑质多巴胺能神经元的退化、损坏继而引起多巴胺分泌减少导致的。治疗帕金森疾病的要点是增加纹状体区域中多巴胺的量，现在临床上的治疗方法是服用一种主要成分为左旋多巴(Levodopa)的小分子药物来补充多巴胺以缓解症状和减慢疾病发展。左旋多巴是多巴胺的前体分子，通过血脑屏障进入中枢系统，经多巴脱羧酶作用转化成多巴胺的方式发挥药理作用，可用于早期患者。帕金森晚期患者还可采用帕金森脑深部电刺激术(Deep brainstimulation，DBS)的对症治疗方法进行治疗(Emily Bell,et al 2016,PMID:26909704)。

根据现在认识到的帕金森疾病的治疗机制，还可以开发一种基因治疗的方法缓解甚至治愈帕金森疾病。目前在开发中的帕金森基因疗法的原理是在体内长期表达治疗性蛋白，以维护神经元的正常功能。多个基于AAV递送载体的帕金森疾病基因治疗项目已进入临床研究阶段，根据所递送基因的不同，治疗机制可以分为以下几种：递送基因表达神经生长因子改善退化神经元的功能，防止进一步的神经退化(William J Marks Jr,et al.LancetNeurol.7(5):400-408.PMID:18387850)，递送基因表达L-氨基酸脱羧酶(L-amino aciddecarboxylase，AADC)促进左旋多巴向多巴胺的转化(C W Christine，et al,Neurology,2009,73(20):1662-1669.PMID:19828868；Shin-ichi Muramatsu,et al,MolecularTherapy.18:1731-1735)，递送基因表达谷氨酸脱羧酶促进神经递质抑制剂GABA的合成(Michael GKaplit t，et al,The Lancet,369:2097-2105.PMID:17586305)，降低丘脑下核的活性来改善晚期帕金森病的症状。慢病毒载体也是一种高效的递送载体，已被用于回体基因治疗药物的递送(Zynteglo)，该产品的上市证明了慢病毒载体的安全性。所以应用慢病毒载体作为体内基因治疗的递送载体也被用到帕金森基因治疗的临床研究上。一种可同时递送限速多巴胺生物合成酶酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase,TH)、AADC和环水解酶1(Cyclohydrolase 1，CH1)基因的三顺反子慢病毒载体(ProSavin,Oxford BioMedica,Oxford,UK)进入帕金森疾病基因治疗完成临床I/II期的研究，对晚期帕金森病患者安全且耐受性良好，所有患者的运动行为均有改善，长期随访(5-8年)安全性良好(StéphanePalfi,et al.Lancet,2014,383(9923):1138-1146.PMID:24412048；Stéphane Palfi,etal.Hum Gene Ther Clin Dev.2018,29(3):148–155.PMID:30156440)。