[发明专利]一种犹素探针UFM1-Lys-TAMRA及其合成方法有效
| 申请号： | 202210101211.9 | 申请日： | 2022-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN114507278B | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 李佳斌;陈聪;李芳;路家琦;许国强 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/107;C09K11/06 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 夏苏娟 |
| 地址： | 215000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 探针 ufm1 lys tamra 及其 合成 方法 | ||
1.一种犹素探针UFM1-Lys-TAMRA的合成方法，其特征在于，包括以下步骤，
S1：利用犹素激活酶活化犹素C端后原位肼解，制备犹素酰肼；
S2：将所述犹素酰肼经原位氧化转化为犹素硫酯；
S3：将所述犹素硫酯直接氨解，获得所述犹素探针UFM1-Lys-TAMRA；
所述步骤S1的具体操作为：向犹素溶液中加入氯化镁、ATP、肼和犹素激活酶，调节pH至7.0-8.0，反应得到所述犹素酰肼；
所述犹素激活酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述犹素的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示，所述犹素与犹素激活酶的摩尔比为45-60：1；
所述步骤S2的具体操作为：将所述犹素酰肼溶于含盐酸胍的缓冲液中，加入酸性亚硝酸钠溶液，在-15℃~-5℃条件下反应；加入美司钠，调节pH至4.0-6.0，反应得到所述犹素硫酯；
所述犹素酰肼、亚硝酸钠和美司钠的摩尔比为1：8-12：35-50；
所述步骤S3的具体操作为：将所述犹素硫酯溶于混合溶剂中，加入苯硫酚钠和Lys-TAMRA，反应得到所述犹素探针UFM1-Lys-TAMRA；
所述混合溶剂为有机溶剂与缓冲盐的混合溶液，所述犹素硫酯、苯硫酚钠和Lys-TAMRA的摩尔比为1：160-250：25-40。
2.如权利要求1所述的犹素探针UFM1-Lys-TAMRA的合成方法，其特征在于，所述肼选自盐酸肼、水合肼和醋酸肼中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的犹素探针UFM1-Lys-TAMRA的合成方法，其特征在于，所述有机溶剂为二甲亚砜，所述缓冲盐为HEPES；二甲亚砜与HEPES的摩尔比为5-7：1。
4.一种权利要求1-3中任一项所述的合成方法制得的犹素探针UFM1-Lys-TAMRA。
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