[发明专利]一种可重复使用的基因测序方法

说明书

本发明提供一种可重复使用的基因测序方法，以磁性微球作为连接待测基因的载体，利用气泡驱动磁性微球加载到芯片表面的微反应室内，在测序的清洗等环节中利用外部磁场将磁性微球限制在微反应室内，测序完成后，解除磁场对于磁性微球的限制，清洗去除磁性微球，芯片可重新用于其他待测基因的测序。

技术领域

本发明涉及一种可重复使用的基因测序方法，属于基因测序领域。

背景技术

近年来，生物芯片或者微流体芯片的研究引起了越来越广泛的关注。典型的微流体芯片一般是指把生物、化学方面的反应、分析、检测等过程集成到一块具备微米尺寸检测单元的芯片上去。微常见的微流控芯片是PDMS类型或者玻璃类型的芯片。一般的PDMS芯片利用聚合物表面的活化基团同其他表面共价键和从而达到封装的目的。一般的玻璃芯片可以通过热键合，胶粘剂等方式进行封装。

基因测序是一种新型基因检测技术，能够从血液或者人体附属物中分析测定基因序列，预测患多种疾病的可能性，如癌症或白血病等。基因测序相关产品和技术已由实验室研究演变到临床使用。基因芯片或者说测序芯片是基因测序用的芯片。目前已经有多种多样的基因测序芯片问世。基因芯片的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出待测核酸的序列。实际使用的时候，测序芯片有很多指标，比如耐压性，荧光性等等。现有的测序芯片通常为一次性使用，每次测序后即废弃此次使用的测序芯片；由于测序芯片一般使用微加工技术、表面处理技术，其成本较高，芯片的一次性使用方式导致了测序成本的提升。本发明提供一种可重复使用测序芯片的测序方法，在完成一次测序实验后，通过简便的清洗步骤清洁测序芯片，即可重新开始下一次测序，测序芯片可重复使用多次。

发明内容

本发明提供一种可重复使用的基因测序方法，其特征在于，包括：

(1)提供基因测序芯片，所述基因测序芯片的内表面有预先加工好的微坑；

(2)提供磁性微颗粒，所述磁性微颗粒用于连接待测基因；

(3)将包含有多个磁性微颗粒的溶液通入芯片，使得磁性微颗粒进入基因测序芯片内表面的微坑中；

(4)提供磁场将磁性微颗粒限制在基因测序芯片的微坑中；

(5)通入测序试剂对磁性微颗粒上连接的待测基因进行测序，所述测序的过程中，磁性微颗粒通过磁场或者其他方式一直被限制在微坑内；

(6)减少或者解除磁场对于磁性微颗粒的限制；

(7)将磁性微颗粒从基因测序芯片中清除；

(8)重复步骤(2)-(6)。

根据优选的实施方式，进行多次测序，步骤(8)变更为重复步骤(2)-(7)。

根据优选的实施方式，所述磁性微颗粒的表面修饰有官能团，用于将待测基因片段连接在磁性微颗粒表面。

根据优选的实施方式，所述官能团是生物素、链霉亲和素、羧基、氨基、硅羟基、环氧乙基、炔基、环炔基、叠氮基等中的一种或多种。

根据优选的实施方式，通过气泡驱动使得磁性微颗粒进入基因测序芯片内表面的微坑中。

根据优选的实施方式，所述气泡驱动指的是，使磁性微颗粒溶液进入基因测序芯片，填充芯片的部分或者全部内部空间，然后正压或者负压通入气体，在芯片的内部空间形成气泡；通过气泡使得磁性微颗粒进入基因测序芯片的微坑内。