[发明专利]用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法

说明书

本发明提供了用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，包括：利用流式细胞分选技术，对荧光标记水平不均一的同一组微球，根据各微球所带荧光素水平的差异，进行限制性分选，分选出荧光标记水平均一、分布集中、离散度小的部分微球，和其他组别的、同样经过分选的荧光微球，组合成新的多重荧光编码微球进行检测。本发明的实际应用价值在于，在流式点阵仪及其它类似设备上采用多重荧光编码微球进行多个生物标志物同时检测时，预先通过在流式分选仪上对每一组微球进行荧光强度的进一步限制性分选，从而达到减少或避免相邻微球间因荧光标记水平有重叠，而引起的相邻微球间发生交叉反应的目的，提高多重指标检测的精准度。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，具体涉及用于控制流式点阵仪中采用的多重荧光编码微球在检测时发生交叉反应的方法。

背景技术

流式点阵仪中采用的荧光编码微球检测技术是一种根据两个反应物之间存在相互结合作用原理，将一种反应物包被到荧光编码微球表面，用于检测另一种与之有结合作用的反应物。在进行多组反应物相互作用的多指标研究中，通过对微球进行多重荧光素、不同荧光强度的组合标记，使得每一种微球有其区别于其他种类微球的、独有的荧光素种类和强度的组合特点，而获得独有的编码。不同编码微球可以包被不同反应物，组合成多重微球的检测试剂，用于多指标的检测。

流式点阵仪是运用多重荧光编码微球进行多指标同时检测，其核心的技术在于微球大小和颗粒度的均一性、以及每个微球标注荧光素的均一性。假如同一组编码微球中每个微球被标记上的荧光素量不相同，微球之间的均一性则不足，流式仪上可见微球群落分布不集中，会引起同一组编码微球中的不同微球个体的荧光强度的离散度比较高，从而导致其中离散在主群落周围的部分微球由于荧光素标记过高或过低的微球发生跨区域偏移现象，而落入邻近的荧光素编码的其他检测微球组中，引起交叉反应现象的发生。

发明内容

采用流式点阵仪进行多重荧光编码微球的多指标检测的技术核心在于微球大小和颗粒度的均一性、以及每组微球标注荧光素的均一性。然而，正如本专利申请实施例里采用的商品化微球实验中所发现的那样，在荧光微球制备过程中，因为微球大小不一，颗粒度不均，以及同组微球的荧光素标记不均等原因，当我们采用不同组别的微球，组合成多重荧光微球的检测试剂时，常常会因为某组微球的荧光信号的离散度较大，导致该组微球的荧光信号漂移到邻近组微球的荧光信号检测区域，从而引起荧光微球之间发生交叉反应的现象。

针对上述技术问题，本发明提供了用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法。通过对每一组荧光微球进行荧光强度的进一步限制性分选，从而达到减少或避免相邻微球间因荧光标记水平有重叠，而引起的相邻微球间发生交叉反应的目的，提高多重指标检测的精准度。

为了实现本发明的技术目的，本发明采用的技术方案为：

用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，包括：利用流式细胞分选技术，对荧光标记水平不均一的同一组微球，根据各微球所带荧光素水平的差异，进行限制性分选，分选出荧光标记水平均一、荧光强度分布集中、离散度小的部分微球和其他组别的、同样经过分选的荧光微球，组合成新的多重荧光编码微球进行检测。

优选地，所述限制性分选包括根据微球在前向散射光FSC和/或侧向散射光SSC的分布数据进行分选。

更优选地，若出现微球在象限中分布不集中，部分微球离散于主群落四周的情况，则根据FSC数据，建立分选门，分选出群落中心区域集中的微球群落，而离散于群落周围的直径小于或者大于设定的标准尺寸的微球以及两个或多个微球粘连体则被不被选中。

更优选地，若出现微球在象限中分布不集中，部分微球离散于主群落四周的情况，则根据SSC数据分布，分选出集中于群落中心的颗粒密度和内部复杂程度一致的微球，而离散于群落周围的内部性质差异度大的微球则不被选中。

优选地，所述限制性分选还包括根据微球标记的荧光素的种类的不同，选择适合该波长的检测通道。