[发明专利]用于修复Klhl18lowf

权利要求书

1.一种靶向Klhl18^lowf突变基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的靶DNA序列位于突变位点上游100bp以内和/或下游100bp以内。

2.如权利要求1所述的靶向Klhl18^lowf突变基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的靶DNA序列为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示序列中的任意一条。

3.如权利要求2所述的靶向Klhl18^lowf突变基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的靶DNA序列如SEQ ID NO：2所示。

4.一种用于修复Klhl18^lowf突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述的基因编辑系统包含：同源修复供体模板，以及权利要求1-3中任一项所述的sgRNA。

5.如权利要求4所述的用于修复Klhl18^lowf突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述的同源修复供体模板由下列步骤设计得到：

S1，以Klhl18^lowf基因序列为模板，sgRNA靶向位点为中心，取所述靶向位点上游不少于200bp和下游不少于200bp的序列，得到同源臂序列；所述同源臂序列包含Klhl18^lowf突变位点，和所述sgRNA的靶DNA序列及其识别的PAM序列；

S2，纠正所述同源臂序列上突变氨基酸序列对应的碱基为野生型氨基酸序列对应的碱基；

S3，检查所述sgRNA的靶DNA序列及其识别的PAM序列是否覆盖Klhl18^lowf突变位点，若未覆盖，则需在步骤S2得到的序列上引入同义突变，将其中的PAM序列改成同义突变序列后，进行步骤S4；否则，直接进行步骤S4；

S4，在步骤S2或S3得到的序列两端各加上所述sgRNA的靶DNA序列及其识别的PAM序列，形成所述的同源修复供体模板。

6.如权利要求5所述的用于修复Klhl18^lowf突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述的Cas9为SaCas9-KKH。

7.如权利要求5所述的用于修复Klhl18^lowf突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述的CRISPR/Cas9基因编辑系统通过腺相关病毒载体递送。

8.一种用于修复Klhl18^lowf突变基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：权利要求4-7中任一项所述的CRISPR/Cas9基因编辑系统。

9.权利要求4-7中任一项所述的CRISPR/Cas9基因编辑系统在制备治疗感音神经性聋的药物中的应用，其特征在于，所述的感音神经性聋为Klhl18^lowf突变基因导致的疾病。

10.一种治疗遗传性感音神经性聋的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：权利要求4-7中任一项所述的CRISPR/Cas9基因编辑系统，以及药学上和生理学上可接受的载体。