[发明专利]一种利用核酸外切酶III检测大肠杆菌的方法及增强型试纸条

权利要求书

1.一种利用核酸外切酶III检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将目标单链DNA和适配体加热，然后自然冷却至室温，得适配体-目标DNA双链；

(2)取适配体-目标DNA双链与待测样品液混合，然后培养，离心，得上清液；

(3)将所得上清液与发夹探针、核酸外切酶III混合，培养，结束后加热，冷却至室温；

(4)取冷却至室温的溶液，添加到金标探针溶液中，孵育，得混合液；

(5)将所得混合液滴到依序设有T线和C线的试纸条上，T线显色为阳性结果，T线不显色为阴性结果；所述T线固定有捕获探针，所述C线固定有质控线探针。

2.根据权利要求1所述的利用核酸外切酶III检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，所述目标单链DNA、适配体、发夹探针、捕获探针和质控线探针的核苷酸序列分别如SEQID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。

3.根据权利要求1所述的利用核酸外切酶III检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述目标单链DNA和适配体的摩尔比例为1:1，所述加热是在94±2℃加热2-4min。

4.根据权利要求1所述的利用核酸外切酶III检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述培养是在37±2℃下培养1.5-2.5h。

5.根据权利要求1所述的利用核酸外切酶III检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述培养是在37±2℃下培养60-80min；所述加热的温度为65-75℃，时间为15-25min；

6.根据权利要求1所述的利用核酸外切酶III检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述金标探针是采用盐老化法制备，是将aDNA探针与金纳米粒子偶联，所述aDNA探针的序列如SEQ ID NO.6所示。

7.根据权利要求1所述的利用核酸外切酶III检测大肠杆菌O157:H7的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述孵育在37±2℃，100-200rpm下孵育15-25min。

8.一种核酸外切酶III增强型试纸条，其特征在于，所述试纸条上依序设置固定有捕获探针的T线和固定有质控线探针的C线，所述捕获探针和质控线探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。

9.根据权利要求8所述的核酸外切酶III增强型试纸条，其特征在于，所述试纸条由样品垫、NC膜、吸水垫、PVC底板4部分组成，所述NC膜贴至PVC底板上，NC膜一侧黏贴吸水垫，另一侧黏贴处理好的样品垫，其中每部分间重叠2±0.5mm，T线和C线位于样品垫和吸水垫中间，T线靠近样品垫，C线靠近吸水垫。