[发明专利]重组人轮状病毒VP7蛋白的表达、免疫原性的分析方法在审
| 申请号： | 202210115142.7 | 申请日： | 2022-02-04 |
| 公开（公告）号： | CN114478714A | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 王红涛 | 申请（专利权）人： | 通化师范学院 |
| 主分类号： | C07K14/14 | 分类号： | C07K14/14;C12N15/46;C12N15/81;C12N1/19;C07K16/10;G01N33/543;G01N33/569;G01N33/577;A61K39/42;A61P31/14;A61P1/12;C12R1/645 |
| 代理公司： | 通化旺维专利商标事务所有限公司 22205 | 代理人： | 王伟 |
| 地址： | 134000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 轮状病毒 vp7 蛋白 表达 免疫原性 分析 方法 | ||
【权利要求书】：
1.重组人轮状病毒VP7蛋白的表达、免疫原性的分析方法，其特征在于制备人轮状病毒VP7酵母蛋白的单克隆抗体，利用RT-PCR扩增目的片段，构建融合表达载体pESP-2-VP7的重组酵母工程菌，IPTG诱导表达蛋白；首先通过查找Genebank获得的轮状病毒VP7核苷酸序列，通过PrimerPremier5.0设计特异性引物，并将VP7基因克连接到18T载体中获得克隆的VP7质粒并进行扩增，经PCR分析，确定成功获得目的基因VP7，并将目的基因导入粟酒裂子酵母pESP-2载体进行原核表达，获得pESP-2-VP7质粒，并通过一系列基因工程方法成功获得表达VP7蛋白的粟酒裂子酵母阳性菌；经SDS-PAGE和Western Blot分析获得纯化的VP7蛋白。
2.按照权利要求1所述的重组人轮状病毒VP7蛋白的表达、免疫原性的分析方法，其特征在于BCA检测得到VP7蛋白浓度为0.58 mg/mL。
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