[发明专利]用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物组及应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物组及应用。本发明提供的引物组的扩增区域包含包括PB1、PB2、PA、HA、NP、NA、MP和NS在内的至少8个H7N9病毒全基因组中的不同区域，将扩增得到的8节段基因组进行拼接即可得到H7N9病毒的全基因组，由于不同亚型的H7N9病毒之间往往在每一节段基因组序列上的差异并不明显，因此，经过分区域扩增再拼接的方法，能够对多种不同亚型的H7N9病毒实现扩增。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物组及应 用。

背景技术

流感病毒正粘病毒科，目前已有三种型别，分别是A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病 毒，其中以A型流感病毒最为常见。A型流感病毒可根据表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA) 进一步划分为17个HA亚型和10个NA亚型。水禽是A型流感病毒的天然宿主，H1至H16，N1 至N9亚型的流感病毒均可以在水禽中发现。流感病毒通过表面蛋白HA和NA的点突变以及不同 亚型病毒之间的基因重配而发生抗原漂变，产生新型流感病毒，其中一些跨越宿主屏障感染缺乏免 疫保护的人类，并且获得在人际间传播的能力，引起流感大流行。

据统计，H7N9病毒存在多种亚型。一些实验研究结果显示一些H7N9亚型禽流感病毒获得了与 人上呼吸道受体结合特性，这有可能增加病毒在人际中的传播能力，并且在人类和家禽宿主中均呈 现出高致病性趋势。

通过测序获得病毒的基因组信息有利于掌握病毒的流行趋势和变异情况，以Sanger双脱氧链终 止法为基础的一代测序方法进行测序则需要在病毒基因序列的保守区域设计设计扩增引物，通过边 扩增边设计测序引物的方法，其缺点在于基因扩增引物只是针对某些地区的某些毒株序列设计的， 通用性不强，需要不断重新设计扩增引物。一个基因就有多个测序引物，一个流感病毒基因组的测 序引物多达几十条，不方便操作。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物组，以弥补目前缺乏 能够广泛用于H7N9病毒多种亚型扩增的通用型引物组的技术空白。

本发明的另一个目的在于，提供应用上述引物组对H7N9病毒进行扩增的方法，以期能够实现 对大量不同亚型H7N9病毒的简便、快捷的扩增。

为了解决上述技术问题，实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物组，所述引物组包括至 少8个分别扩增H7N9病毒全基因组不同区域的引物对，所述不同区域包括PB1、PB2、PA、HA、 NP、NA、MP和NS。

在可选的实施方式中，扩增PB1区域的引物对选自引物对1、引物对2或引物对3中的至少一 种；扩增PB2区域的引物对选自引物对4、引物对5或引物对6中的至少一种；扩增PA区域的引物 对选自引物对7、引物对8或引物对9中的至少一种；扩增HA区域的引物对选自引物对10、引物 对11或引物对12中的至少一种；扩增NP区域的引物对选自引物对13和/或引物对14；扩增NA区 域的引物对选自引物对15和/或引物对16；扩增MP区域的引物对选自引物对17、引物对18或引 物对19中的至少一种；扩增NS区域的引物对选自引物对20和/或引物对21。