[发明专利]一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法

权利要求书

1.一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，包括(1)筛选数据库记载的各种致病性冠状病毒及其变异毒株的超保守基因、保守基因和/或保守微卫星；(2)从所述超保守基因、保守基因和/或保守微卫星中筛选保守靶标siRNA；(3)以常规方法筛选数据库记载的各种致病性冠状病毒及其变异毒株的常规靶标siRNA；(4)迭代筛选所述保守靶标siRNA和常规靶标siRNA，并通过比对或保守微卫星拼接，获得以各毒株共有保守基因为靶标的广谱siRNA；(5)分别合成广谱siRNA、RBD和/或ACE2；(6)将广谱siRNA与RBD和/或ACE2进行连接，分别合成以RBD或ACE2靶向递送siRNA的广谱抗变异毒株靶向基因治疗药物RBDnCOVsiRNA或ACE2nCOVsiRNA。

2.根据权利要求1所述的一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，所述RBDnCOVsiRNA包括以nCOVsiRNA的正反义链合成小发夹双链shRNA，然后将RBD分别连接到shRNA的正反义链上，构成以RBD靶向递送shRNA的化合物。

3.根据权利要求1所述的一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，所述ACE2nCOVsiRNA包括以nCOVsiRNA的正反义链合成小发夹双链shRNA，然后将ACE2分别连接到shRNA的正反义链上，构成以ACE2靶向递送shRNA的化合物。

4.根据权利要求1、2或3任一所述的一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，所述合成shRNA包括分别合成2条互补的约21-25nt的siRNA寡核苷酸多肽和起间隔作用的loop环碱基序列，然后将所合成的siRNA和loop环连接成由loop环间隔而成的小发夹shRNA双链。

5.根据权利要求1所述的一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，所述以保守基因为靶标是指靶向所述保守基因的siRNA序列包括但不限于SEQ ID NO.1～41；所述以超保守基因、保守基因或保守微卫星为靶标的广谱siRNA序列包括但不限于SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5；所述保守基因包括但不限于NC_045512.2株、DELTA变异株和/或OMICRON变异株共有的基因序列，其siRNA序列包括但不限于SEQ ID NO.9～11、SEQ ID NO.16～20、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26～27、SEQ IDNO.31～33、SEQ ID NO.35或SEQ ID NO.37～39。

6.根据权利要求1所述的一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，所述合成RBD包括但不限于合成S蛋白的第319-510位氨基酸序列、能与ACE2结合但不易发生变异的N439、V483和Q493位点的保守氨基酸序列以及经密码子优化的氨基酸序列。

7.根据权利要求1所述的一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，所述RBDnCOVsiRNA包括以RBD多肽或S蛋白多肽与siRNA相连接构成的结合物RBD-siRNA和S-siRNA，以及其脂质体修饰复合物RBD-siRNA/Lip和S-siRNA/Lip。

8.根据权利要求1所述的一种以新型载体递送的抗变异毒株保守靶标nCOVsiRNA的筛选方法，其特征在于，所述ACE2包括全长ACE2、胞外ACE2、跨膜ACE2、胞内ACE2或密码子优化的ACE2多肽。