[发明专利]一种293T细胞瞬时表达目标蛋白的方法及其应用在审
| 申请号： | 202210118452.4 | 申请日： | 2022-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN114410682A | 公开（公告）日： | 2022-04-29 |
| 发明（设计）人： | 邹炳德;邹继华;宋丹丽;唐云霞;丁建静;章玉胜 | 申请（专利权）人： | 美康生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C07K14/47;C12N5/10 |
| 代理公司： | 浙江中桓凯通专利代理有限公司 33376 | 代理人： | 李美宝 |
| 地址： | 315000 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 293 细胞 瞬时 表达 目标 蛋白 方法 及其 应用 | ||
1.一种293T细胞瞬时表达目标蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10：获得目标DNA和293T细胞，进行转染，获得转染后的293T细胞；
S20：对所述转染后的293T细胞进行培养，并添加培养基以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂和/或铜离子；
S30：维持培养温度低于37℃，并进行补料，获得补料后的293T细胞上清；
S40：对所述补料后的293T细胞上清进行纯化，获得目标蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S30包括：维持培养温度低于37℃，每天进行补料，培养5-14天，获得所述补料后的293T细胞上清。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂包括丁酸钠。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述添加铜离子包括添加硫酸铜。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养温度为33℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述补料的添加物体积为培养基体积的2％-4％。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述获得转染后的293T细胞，包括以下步骤：
S11：混合目标DNA与转染试剂，获得DNA-转染试剂混合液；
S12：将所述DNA-转染试剂混合液加入293T细胞培养液中，获得所述转染后的293T细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，目标DNA与所述转染试剂的质量比为1：4。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述转染试剂为PEI。
10.一种权利要求1-9任一项所述方法的应用，其特征在于，应用于重组蛋白表达。
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