[发明专利]一种293T细胞瞬时表达目标蛋白的方法及其应用

说明书

本发明提供了一种293T细胞瞬时表达目标蛋白的方法及其应用，方法包括以下步骤：S10：获得目标DNA和293T细胞，进行转染，获得转染后的293T细胞；S20：对转染后的293T细胞进行培养，并添加培养基以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂和/或铜离子；S30：维持培养温度低于37℃，并进行补料，获得补料后的293T细胞上清；S40：对补料后的293T细胞上清进行纯化，获得目标蛋白。本发明解决了当前重组蛋白在293T细胞瞬时表达水平低，导致生产成本较高的技术问题，实现了提高重组蛋白在293T细胞瞬时表达水平，降低生产成本的技术效果。

技术领域

本发明涉及基因表达技术领域，具体而言，涉及一种293T细胞瞬时表达目标蛋白的方法及其应用。

背景技术

瞬时表达是指外源基因进入受体细胞后存在于游离的载体上不整合至染色体，在较短时间内就可获得目的基因的表达产物的方法。相比于稳定表达，瞬时表达大大缩短了微量重组蛋白的生产过程，它适用于对宿主细胞有一定毒性的蛋白，或需要提供数量小，但是种类繁多的蛋白等。

293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制，从而提高外源基因的表达水平。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。

综上所述，用293T细胞进行瞬时表达蛋白是一种较好且常用的方法，但其存在瞬时表达的水平低，导致蛋白生产成本较高的问题。

发明内容

本发明解决了当前重组蛋白在293T细胞瞬时表达水平低，导致生产成本较高的技术问题，实现了提高重组蛋白在293T细胞瞬时表达水平，降低生产成本的技术效果。

为解决上述问题，本发明提供了一种293T细胞瞬时表达目标蛋白的方法，包括以下步骤：S10：获得目标DNA和293T细胞，进行转染，获得转染后的293T细胞；S20：对转染后的293T细胞进行培养，并添加培养基以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂和/或铜离子；S30：维持培养温度低于37℃，并进行补料，获得补料后的293T细胞上清；S40：对补料后的293T细胞上清进行纯化，获得目标蛋白。

与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：在293T细胞瞬时表达中，对其瞬时转染后优化其培养条件来提高表达量，本发明通过补料的方式，提高293T细胞瞬时表达目标蛋白水平，操作简单高效，具体为通过对转染后的293T细胞进行补液，降温，添加组蛋白去乙酰化酶抑制剂和/或铜离子，补料的方式能增加了细胞培养周期，提高了293T细胞瞬时表达目标蛋白水平，提升目标蛋白表达量，从而降低生产成本，便于实现工业化生产。

在本发明的一个实例中，S30包括：维持培养温度低于37℃，每天进行补料，培养5-14天，获得补料后的293T细胞上清。

与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：每天进行补料，能够增加细胞培养周期，提高293T细胞瞬时表达，从而降低生产成本。

在本发明的一个实例中，组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丁酸钠。

与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：丁酸钠是一种短脂肪酸链，是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂，其通过降低酶活性改变哺乳动物细胞染色质结构，进而通过组蛋白的乙酰化和去乙酰化调节基因的转录水平。丁酸钠选择性诱导能够对蛋白表达产量有明显地提高，但其对细胞也有一定的毒性，因此需要在培养基中添加合适浓度的丁酸钠。

在本发明的一个实例中，添加铜离子包括添加硫酸铜。