[发明专利]一种非洲猪瘟单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明一方面公开了一种非洲猪瘟病毒单克隆抗体，所述的单克隆抗体的的重链可变区序列如SEQ ID NO.2所示，所述的单克隆抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.3所示。所述的单克隆抗体结合的抗原表位位于非洲猪瘟病毒P72的aa487‑aa498位。本发明还公开了一种制备所述的单克隆抗体的方法。本发明还公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒抗体的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的单克隆抗体和有效量的非洲猪瘟病毒P72蛋白；以及对非洲猪瘟病毒抗体反应进行检测的检测试剂。本发明制备的抗非洲猪瘟病毒P72蛋白的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性，适用于制备不同的非洲猪瘟病毒诊断试剂，如胶体金、ELISA、化学发光等检测试剂盒。

技术领域

本发明属于病毒疫病诊断技术和动物检疫领域，具体涉及一种非洲猪瘟单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

非洲猪瘟(英文名称：Infection with African swine fever virus，简称：ASF)是由非洲猪瘟病毒(英文名称：African Swine fever virus，简称：ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)而引起的一种急性、出血性、烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，该病也是我国重点防范的一类动物疫情。其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100％，临床表现为发热(达40～42℃)，心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血，非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似，只能依靠实验室监测确诊。2018年8月3日，中国确诊首例非洲猪瘟疫情。截止当前，仍然没有疫苗用于非洲猪瘟防疫，因此实验室检测和诊断是当前非洲猪瘟防控的重点。

ASFV是一种双链的核质大DNA病毒(Nucleocytoplasmic Large DNA Viruses,NCLDV)。根据不同的病毒株型，基因组DNA的碱基数约为17万到19万，其中含有151至167个开放阅读框(Opening Reading Frames,ORFs)[Alejo A,Matamoros T,Guerra M,AndrésG.,2018.A Proteomic Atlas of the African Swine Fever Virus Particle.J Virol92:e01293-18.]。2019年9月17日，清华大学医学院向烨团队在《Cell Research》在线发表题为《Structure of the African swine fever virus major capsid protein p72》的学术论文。该研究采用冷冻电镜单颗粒三维重构的方法首次解析了非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72高达2.67埃分辨率结构，揭示了非洲猪瘟病毒衣壳可能的组装机制，为非洲猪瘟病毒亚单位疫苗的开发迈出了坚实的一步。此前基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的亚单位疫苗研究已有很多尝试，但没有获得良好结果。分析前期相关研究失败原因很可能是没有使用正确折叠的p72蛋白。正确折叠p72蛋白的获取以及其高分辨率结构的确定有助于我们开发靶向病毒衣壳组装的药物以及亚单位疫苗和诊断靶点。因此，需要开发一种针对非洲猪瘟病毒P72蛋白的单克隆抗体，以用于非洲猪瘟病的鉴定以及诊断试剂的研发和应用。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一，提供一种非洲猪瘟病毒P72蛋白的单克隆抗体及其制备方法；本发明的目的之二，提供了一种使用本发明制备的P72蛋白和单克隆抗体制备非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒。

因此，本发明一方面公开了一种非洲猪瘟病毒单克隆抗体，所述的单克隆抗体能特异性结合非洲猪瘟病毒P72蛋白，所述的单克隆抗体的的重链可变区序列如SEQ ID NO.2所示，所述的单克隆抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.3所示。

优选地，本发明所述的单克隆抗体结合的抗原表位位于非洲猪瘟病毒P72的aa487-aa498位。

优选地，本发明所述的非洲猪瘟病毒P72的aa487-aa498位氨基酸序列为WHKFGHVVNAIM。