[发明专利]基于CRISPR检测脑卒中相关TYMS基因的试剂盒

权利要求书

1.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括突变型crDNA或突变型crRNA；

所述突变型crDNA包括：

rs699517突变型crDNA，其序列如SEQ ID NO.1所示；

和/或rs2790突变型crDNA，其序列如SEQ ID NO.2所示；

所述突变型crRNA包括：

rs699517突变型crRNA，其序列如SEQ ID NO.3所示；

和/或rs2790突变型crRNA，其序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括用于特异性扩增TYMS基因上rs699517位点的引物对：rs699517-F，其序列如SEQ ID NO.5所示，rs699517-R，其序列如SEQ ID NO.6所示；和/或用于特异性扩增TYMS基因上rs2790位点的引物对：rs2790-F，其序列如SEQ ID NO.7所示；rs2790-R，其序列如SEQ ID NO.8所示。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括cas12a蛋白。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括荧光探针，所述荧光探针的5’端标记有荧光报告基团，所述荧光探针的3’端标记有荧光猝灭基团。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括DNA酶抑制剂。

6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中包括阴性对照品，所述阴性对照品为野生型crDNA或野生型crRNA：

所述野生型crDNA包括：

rs699517野生型crDNA，其序列如SEQ ID NO.9所示；

和/或rs2790野生型crDNA，其序列如SEQ ID NO.10所示；

所述野生型crRNA包括：

rs699517野生型crRNA，其序列如SEQ ID NO.11所示；

和/或rs2790野生型crRNA，其序列如SEQ ID NO.12所示。

7.如权利要求1所述检测试剂盒在检测与脑卒中相关TYMS基因突变中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用的过程具体为：对待测DNA样品进行PCR扩增，扩增完成后加入检测混合液反应，并采集荧光变化；所述检测混合液含有荧光探针和权利要求1所述突变型crRNA；所述突变型crDNA在T7 RNA聚合酶作用下生成RNA，经回收纯化得到对应的crRNA。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：95℃3min进行预变性；95℃10s，60℃20s，循环30次；最后降温至25℃，反应结束。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述检测混合液共50uL，具体为：250～500nM纯化的cas12a蛋白，250～500nM突变型crRNA，1～5μL荧光探针，2μL DNA酶抑制剂，无酶水余量。