[发明专利]一种可视化检测氯霉素的纳米酶检测试剂及其检测方法

权利要求书

1.一种可视化检测氯霉素的纳米酶检测试剂，其特征在于，包含有序列为SEQ ID NO.1的CAP适配体；序列为SEQ ID NO.2的发夹DNA HP1；序列为SEQ ID NO.3的发夹DNA HP2。

2.一种使用权利要求1所述纳米酶检测试剂检测氯霉素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)Cu₃BiS₃纳米材料的制备：按照常规方法制备Cu₃BiS₃纳米粉末材料；

(2)生物反应：将不同浓度的氯霉素溶液和不同浓度的SEQ ID NO.1的CAP适配体对应混合加入到Tris-HAc缓冲液中孵育；随后将序列为SEQ ID NO.2的发夹DNA HP1和序列为SEQ ID NO.3的发夹DNAHP2依次加入上述缓冲液中进行催化发夹组装反应；最后加入λ核酸外切酶和λ核酸外切酶反应缓冲液消化组装反应的产物；

(3)吸光度的测定：将步骤(1)获得的Cu₃BiS₃纳米粉末材料制备成悬浮液，加入到步骤(2)最后所得的溶液中，加入K₄[Fe(CN)₆]溶液、HAc-NaAc缓冲液、TMB和H₂O₂，反应后测定吸光度；

(4)线性模型构建：通过步骤(3)所得的不同已知氯霉素浓度的吸光度A，和氯霉素浓度为0的样品所得的吸光度值A₀，计算得到不同浓度相应的吸光度差值A-A₀；然后利用不同已知氯霉素浓度的对数值和相应吸光度的差值构建线性模型；

(5)利用上述线性模型检测未知氯霉素浓度的溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，Cu₃BiS₃纳米材料的制备步骤为：

将质量比为4:5-5:1之间的可溶性铋盐和可溶性铜盐分别溶解在乙二醇中并混合均匀；

然后将溶于无水乙醇中的与上述盐的总质量比为1:10-1:1的硫脲加入到上述混合液中，搅拌20-50分钟；

随后，将得到的混合溶液转移至高压反应釜中，在120-180℃条件下反应5-12小时；冷却至室温后，将所得样品用乙醇和去离子水洗涤数次，最终样品在50-70℃条件下干燥过夜得Cu₃BiS₃纳米材料的粉末样品。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述可溶性铋盐为硝酸铋或硫酸铋；所述可溶性铜盐为硝酸铜或硫酸铜。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述CAP适配体与发夹DNA HP1和发夹DNA HP2的摩尔比为1:20:20。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述孵育的条件为35-40℃，0.5-2h；所述消化组装反应的条件为35-40℃，0.5-2h。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，Cu₃BiS₃纳米粉末材料制备成悬浮液时浓度为0.5-1.5mg/mL。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述吸光度在640-660nm处测定。

9.一种可视化检测氯霉素的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的纳米酶检测试剂。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还含有Cu₃BiS₃纳米粉末材料、氯霉素标准品溶液、λ核酸外切酶、K₄[Fe(CN)₆]溶液、HAc-NaAc缓冲液、TMB和H₂O₂。