[发明专利]一种可视化检测氯霉素的纳米酶检测试剂及其检测方法

说明书

本发明公开了一种可视化检测氯霉素的纳米酶检测试剂及其检测方法，该方法利用纳米酶的催化反应与核酸的催化发夹组装反应相联合实现信号的触发与放大。本发明开拓了基于纳米酶的均相生物分析在CAP检测中的应用。与现有方法相比，本方法具有成本低、操作简便、特异性强、灵敏度高等优势，有望成为食品安全、化妆品监管领域中针对大量样品快速筛查CAP的方法之一。

技术领域

本发明涉及分析检测领域，尤其是涉及一种可视化检测氯霉素的纳米酶检测试剂及其检测方法。

背景技术

氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一种广谱抗生素，是世界上首种完全由合成方法大量制造的抗生素，对革兰氏阳性、阴性菌均有抑制作用，是畜禽疾病防治的重要常用药。并且，由于其对皮肤炎症具有一定疗效，也曾被违法添加到各类化妆品中，如祛痘类产品。但是，CAP具有严重的毒副作用，其在食品中的残留或经皮肤长期吸收后会引起再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等恶性疾病，严重威胁人类健康。欧美等发达国家已禁止使用CAP，我国农业部第193号公告《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》以及最新2015年版《化妆品卫生规范》将CAP列为禁用物质，不得检出。

CAP现有的测定方法主要有微生物法、色谱分析法、免疫分析法等。微生物法虽然经济、操作简便，但其灵敏度和特异性往往受到其它微生物抑制剂的干扰。色谱法虽然灵敏度高、结果较为准确，但使用仪器较为昂贵、前处理及操作步骤较为繁琐，不适于大量样本的筛查。免疫分析法快速、灵敏、特异性好，能满足大量样品的快速筛查；但是，抗体的制备过程耗时、繁琐、成本高。因此，发展简便、快速、低成本的CAP分析方法仍然很有必要。

纳米酶作为新型的具有天然酶活性的一类材料，具有同天然酶相类似的高效催化活性，却比天然酶具有更好的稳定性、价廉易得、活性容易调控等优点[K.L.Fan,C.Q.Cao,Y.X.Pan,D.Lu,D.L.Yang,J.Feng,L.N.Song,M.M.Liang,X.Y.Yan,Magnetoferritinnanoparticles for targeting and visualizing tumour tissues,Nat.Nanotechnol.7(2012)459-464；Y.Y.Huang,J.S.Ren,X.G.Qu,Nanozymes:classification,catalyticmechanisms,activity regulation,and applications,Chem.Rev.11(2019)4357-4412.]。因此，利用纳米酶的信号放大作用以进行分析检测的研究也得到了越来越多的关注。例如，利用纳米酶的信号放大作用结合光电化学分析[Zhu,X.,Gao,L.,Tang,L.,Peng,B.,Huang,H.W.,Wang,J.J.,Yu,J.F.,Ouyang,X.L.,Tan,J.S.Biosens.Bioelectron.,2019,146,111756]、化学发光分析[Li,S.H.,Ma,X.H.,Pang,C.H.,Wang,M.Y.,Yin,G.H.,Xu,Z.,Li,J.P.,Luo,J.H.2021,176,112944]以及比色法[王颖，李风亭，张冰如，徐金金。专利号：CN201710263737.6]检测CAP的研究已有报道。这其中，比色法是一种非常简便、受欢迎的分析方法，其通过肉眼观察来测定物质而无需使用特殊的仪器。但是，目前所报道的基于金属有机骨架化合物纳米酶以实现CAP检测的比色方法是信号减弱模式，很容易产生虚假信号。并且，该方法需要把生物分子标记到纳米材料表面，导致测定成本较高(将生物分子进行标记)、步骤较为复杂。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种可视化检测氯霉素的纳米酶检测试剂及其检测方法。本发明是在Cu₃BiS₃纳米棒材料表面原位形成的亚铁氰化铋(BiHCF)纳米酶，并建立了基于该纳米酶的比色检测CAP的方法。该纳米酶活性较高且容易制备，所建立的CAP分析方法无需生物分子的标记和固定化，具有省时、成本低、灵敏度高、选择性好等优势。

本发明的技术方案如下：