[发明专利]大肠杆菌的高密度培养及在催化生产槲皮素中的应用

权利要求书

1.一种能够利用芦丁生产槲皮素的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌表达嗜热链球菌来源的L-鼠李糖苷酶和耐热β-葡萄糖苷酶；所述L-鼠李糖苷酶DthRha具有如Genbank登录号WP_012548615.1所示的氨基酸序列；所述β-葡萄糖苷酶Dth3具有如Genbank登录号ACI19278.1所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，编码所述DthRha的基因序列如SEQ ID NO.1所示，编码所述Dth3的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1或2所述的重组大肠杆菌，其特征在于，以pET系列载体表达所述L-鼠李糖苷酶和耐热β-葡萄糖苷酶。

4.根据权利要求1～3任一所述的重组大肠杆菌，其特征在于，以E.coli BL21(DE3)为宿主。

5.含权利要求1～4任一所述重组大肠杆菌的细胞催化剂，其特征在于，所述细胞催化剂包括但不限于所述重组大肠杆菌的细胞、细胞培养液或固定化细胞。

6.权利要求1～4任一所述重组大肠杆菌的高密度发酵方法，其特征在于，将所述重组大肠杆菌接种至发酵培养基中，于35～37℃发酵，发酵过程溶氧控制为40％，pH为7.0；并于发酵12h后降温至30℃开始补料，补料流速为20mL/h；

所述发酵培养基包括但不限于TB培养基或高密度发酵培养基；所述高密度发酵培养基含有KH₂PO₄ 6g/L、K₂HPO₄·3H₂O 16.4g/L、(NH₄)₂SO₄ 5g/L、无水柠檬酸1g/L、MgSO₄·7H₂O1g/L、酵母粉10g/L、甘油10-30g/L、麦芽糖糊精10g/L、维生素B1 0.1g/L和微量元素溶液1mL/L；所述微量元素溶液含有：柠檬酸铁100g/L,ZnCl₃ 18g/L,MnSO₄·H₂O 14.64g/L,CuSO₄·5H₂O 0.75g/L,Na₂MoO₄·2H₂O 2g/L,CaCl₂.2H₂O 2g/L,H₃BO₃ 3.0g/L,CoCl₂·6H₂O2.5g/L,NiSO₄·6H₂O 2.5g/L和HCl 100mL。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，补料的成分包括：3g/L MgSO₄·7H₂O、10g/L酵母粉和500g/L甘油。

8.一种生产槲皮素的方法，其特征在于，以芦丁为底物，以权利要求1～4任一所述的重组大肠杆菌为细胞催化剂生产槲皮素。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，将所述重组大肠杆菌细胞加入至含终浓度10～40g/L芦丁的反应体系中，于75～85℃反应至少4h。

10.权利要求1～4所述重组大肠杆菌，或权利要求5所述的细胞催化剂，或权利要求6～9任一所述方法在生产含槲皮素的食品、药品或保健品中的应用。