[发明专利]Gal-9作为靶点在筛选或制备治疗B细胞淋巴瘤的药物中的应用

说明书

本发明提供了一种抑制Gal‑9表达的shRNA、shRNA表达载体和纳米颗粒及其应用，所述shRNA为shGal‑9‑01、shGal‑9‑02、shGal‑9‑03或shGal‑9‑04；本发明通过该shRNA、shRNA表达载体和纳米颗粒靶向Gal‑9基因降低其表达水平，抑制B细胞淋巴瘤的增殖，从而治疗B细胞淋巴瘤。与现有的放射性治疗和化疗药物相比，本发明提供的shRNA、shRNA表达载体和纳米颗粒的毒副作用小，也没有遗传风险，且比靶向治疗中的单克隆抗体的生产成本低，有利于后期的转化应用。

技术领域

本发明涉及Gal-9作为靶点在筛选或制备治疗B细胞淋巴瘤的药物中的应用。

背景技术

恶性淋巴瘤作为原发于淋巴结和其他器官淋巴组织的恶性肿瘤，是造血系统的恶性疾病之一，分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lyphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma，NHL)两大类，其中，B细胞淋巴瘤(B cell lymphoma,BCL)占恶性淋巴瘤的绝大部分：HL为起源于B细胞的肿瘤，且NHL中80％～85％为B细胞型。半乳糖苷凝集素9(Galectin-9，Gal-9)是β半乳糖苷凝集素家族的一员，可通过非经典分泌途径被分泌到细胞外，同时具有细胞内和细胞外功能，参与多种生理及病理过程的调控。目前尚未见到靶向Gal-9用于治疗B细胞淋巴瘤的报道。

RNA干扰(RNAi)是有效沉默或抑制目标基因表达的过程，该过程通过双链RNA(dsRNA)使目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。沉默机制可导致由小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)诱导实现靶mRNA的降解。目前，siRNA稳定性不理想、药代动力学特征较差、可能诱导脱靶效应等缺点，限制了其在体内的应用，而shRNA比siRNA的优势包括能够使用质粒载体进行转染，减少脱靶效应等，但同样面临系统给药时到达靶细胞的各种体内屏障，为了克服这个问题，可以将shRNA与纳米颗粒结合，以实现安全传输。

当前B淋巴瘤的治疗技术有放化疗和靶向治疗，存在毒副作用大，完全患者复发转移率高等特点，因而靶向治疗是B淋巴瘤的发展方向，但是单克隆抗体存在研发成本高，半衰期短，特异性不确定等特点，siRNA技术相对来说研发成本相对较低，与纳米技术结合之后，体内稳定性好，特异性强等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制Gal-9表达的shRNA、shRNA表达载体和纳米颗粒及其应用，本发明通过该shRNA、shRNA表达载体和纳米颗粒靶向Gal-9基因降低其表达水平，抑制B细胞淋巴瘤的增殖，从而治疗B细胞淋巴瘤。

为实现上述目的，所采取的技术方案：一种抑制Gal-9表达的shRNA，所述shRNA为shGal-9-01、shGal-9-02、shGal-9-03或shGal-9-04；

所述shGal-9-01的正义链序列如SEQ ID NO:7所示，所述shGal-9-01的反义链序列如SEQ ID NO:8所示；

所述shGal-9-01的正义链序列如SEQ ID NO:9所示，所述shGal-9-01的反义链序列如SEQ ID NO:10所示；

所述shGal-9-01的正义链序列如SEQ ID NO:11所示，所述shGal-9-01的反义链序列如SEQ ID NO:12所示；

所述shGal-9-01的正义链序列如SEQ ID NO:13所示，所述shGal-9-01的反义链序列如SEQ ID NO:14所示。

本发明提供了一种抑制Gal-9表达的shRNA表达载体，所述shRNA表达载体是将上述所述的shRNA连接至基础载体上而得到的。

优选地，所述基础载体为pLKO.1-TRC克隆载体。