[发明专利]一种磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体、ELISA试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体重链氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.如权利要求1所述的磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述磷酸化TaupT217蛋白单克隆抗体是由杂交瘤细胞株Tau-6G12分泌得到，所述杂交瘤细胞株Tau-6G12已在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)进行保藏；地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2021年12月30日；保藏编号为：CCTCC NO：C2021304。

3.如权利要求1所述的磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体，其特征在于，编码所述磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体重链核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码所述磷酸化TaupT217蛋白单克隆抗体轻链核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.一种ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括权利要求1～3任一项所述的磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体、tau(412～434)蛋白多克隆抗体、酶标板、封闭液、HRP-羊抗鼠IgG二抗、显色液、终止液、包被液和洗涤液。

5.如权利要求4所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体作为捕获抗体，所述tau(412～434)蛋白多克隆抗体作为检测抗体。

6.如权利要求4所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体稀释度为(1:600)～(1:4800)；所述tau(412～434)蛋白多克隆抗体稀释度为(1:600)～(1:9600)。

7.如权利要求4所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述HRP-羊抗鼠IgG二抗稀释度为(1:3200)～(1:12800)。

8.权利要求4～7任一项所述的ELISA试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)纯化单抗包被：用包被液将磷酸化Tau pT217蛋白单克隆抗体稀释，4℃过夜，每孔100μL，4℃冰箱过夜；

2)封闭：每孔加200μL封闭液，于37℃孵育0.5～1.5h；

3)加抗原：每孔加100μL样品，于37℃孵育1～2h；

4)加纯化多抗：用封闭液将tau(412～434)蛋白多克隆抗体稀释，37℃孵育1～2h，每孔100μL；

5)加酶标二抗：用封闭液将HRP-羊抗鼠IgG二抗稀释，37℃孵育1～2h，每孔100μL；

6)底物显色：每孔加显色液100μL，显色10min；

7)终止反应：每孔加2mol/L浓硫酸50μL/孔，测定OD_450nm反应值；

在第1)～5)每步之间用洗涤液洗板3～5次，每次6～10min。

9.如权利要求8所述的ELISA试剂盒的使用方法，其特征在于，所述封闭液选自5％脱脂乳粉、2.5％脱脂乳粉、0.5％脱脂乳粉、3％BSA、1％BSA和0.5％BSA中的一种。

10.权利要求4～7任一项所述的ELISA试剂盒在制备检测阿尔茨海默病试剂中的应用。